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384孔板格式的全自动动力学溶解度屏幕使用Nephelometry

Caroline Green Seona McKee Ken Saunders 辉瑞全球研究 10/2004
  • 比浊法是一种快速、可靠和低成本的384孔板溶解度筛选方法
  • 75分钟内测定24种化合物的动态溶解度
  • 溶解度曲线的特殊拟合方法

介绍

在药物发现产业中,在较早阶段测量更多的化合物,并且以更高的吞吐量来测量Adme和物理化学性质,以突出潜在的Adme问题并减少磨损,以获得更多的化合物。溶解度是化合物最重要的特性之一,并且在早期阶段识别溶解性问题是宝贵的。不仅低溶解度化合物更难以开发,获得Adme筛选的可再现数据,例如Caco-2和亲脂性也更耗时和昂贵。因此,在运行更昂贵的Adme屏幕之前确定溶解度的快速,低成本的方法是有用的工具。


激光浊度法已被证明是一种可靠的测量96孔板动态溶解度的技术。激光比浊法是测量激光光束通过溶液时的前向散射光。溶液中的微粒越多,前向散射光的量就越大(以计数来测量)。这项工作表明,该技术已发展为384井板格式的全自动快速动态溶解度筛管。


材料与方法

  • 液体处理机器人已与BMG Labtech Nephelostar集成德赢vwin官网客服®为发现化合物提供全自动的动态溶解度筛选系统
  • 机器人配备有1毫升注射器,固定的针头和一个ROMA手臂。
  • 已经优化了液体处理,移液体积,板式,板读取,时间调度和处理软件,导致24种化合物的75分钟的分析和数据处理时间为75分钟(每384孔板的四包装中的8种化合物)。
  • 该系统已通过38种商业和内部化合物的验证。

实验

  • 在5%DMSO中以0.6mm或1.2mm制备股票溶液:手动95%PBS缓冲液。
  • 对于单批24种化合物(3个平板),将储备溶液稀释至通过机器人5%DMSO:95%PBS缓冲液的板上的摩尔性降低。
  • 所有样品的最佳净体积均为100 μL。这是适合384孔板的最大体积,同时在低体积(< 5 μL)下最小化移液误差。
  • 垂直读取每块板,增益为100,激光强度为90%,以产生每口井的原始计数数据。
  • 所有的原始数据都使用BMG实验室火星数据分析软件进行处理。德赢vwin官网客服

成绩与讨论

下面的下图(图1)显示:平均计数(n = 4)绘制初始酮,氢化腙,乙酰丙烯和扑热氨基酚的浓度。

对于前3种化合物,计数的显着增加,该计数对应于预先溶液的化合物。两个线性线适配给数据,它们交叉作为动力学溶解度的数据。扑热酰胺醇的图显示,没有沉淀点,其表明在覆盖的浓度范围内完全溶解性。已选择氢化腙作为对照化合物,以评估批量以批量变化的系统。图2显示了Hydrocortizone在6次不同的日子(n = 14)上运行的结果。平均结果是(289±14)μg/ ml。将来,每批中的氢化术中的结果将不得不落在该范围内进行批次的批量。系统的批量变异性为5%。

复合 这项工作一个
μg/ ml
文学b
μg/ ml
Hydrocortizone 289 > 181.
酪氨酸 63 91
丙醇 > 156 41 (10)c
对乙酰氨基酚 > 88 NA.
孕酮 30. 20.
Dofetilide 132 NA.
乙酰唑胺 > 118 > 111
硝基脲 > 119 > 99
TheObromine. 80 90
布洛芬 > 123 52(1)c

一个在pH 7.4的384孔板中测量溶解度。
b在pH7.4的96孔板格式中测量溶解度。
c在括号中给出的pH值下,在96孔板中测量溶解度。

作为验证的一部分,38种化合物已经在这里描述的系统上运行。38种化合物中有35种可以测出溶解度。没有结果的原因是平均计数图和集中计数图过于分散,无法符合任何合理的直线。本研究中测定的10种化合物之前已经使用96孔板格式的浊度测定技术进行了测定。从表1可以看出,采用全自动384孔板法与手动96孔板法的结果比较良好。


结论

  • 这种新颖的全自动动态溶解度筛,384孔板格式,可以在75分钟内分析24种化合物,批对批的可变性为5%。
  • 筛网可用于测量和将大约90%的发现化合物的动力学溶解度排列在筛选中。
  • 结果将作为测量值报告,部分可溶性(>100 μg/mL)标记为绿色,部分可溶性(15 - 100 μg/mL)标记为琥珀色(黄色),低可溶性(<15 μg/mL)标记为红色。
  • 该系统可以很容易地适应与替代缓冲器和小灵通工作。

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