226.

光谱星纳米检测酒精饮料中游离氨基氮含量的新方法

Gary Spedding (1) Nathan R Harrison (1) Franka Ganske (2) EJ Dell (2) (1) Brewing and Distilling analysis Services LLC(酿造和蒸馏分德赢vwin官网客服析服务有限公司 05/2012
  • 基于茚三酮的测定检测饮料和食物分析中​​的游离氨基氮(风扇)
  • 缩小原来的分析减少试剂和限制浪费
  • 光谱®纳米是测量比色皿和微孔板吸光度的最佳读者

表的内容

介绍

标准酿造质量控制分析包括对游离氨基氮(风扇)的测试。这允许估计蛋白质含量,并且是啤酒质量指标。确定贝尔蛋白质含量的传统方式是基于Kjeldahl测定,它们精心制作和相当昂贵。该测定的替代方案是用于比色皿的茚三酮的风扇测定。酿造行业使用40 - 50年的标准测定。可以在茚三酮的帮助下检测伯氨基酸。结果是蓝色染料,其显示在约570nm的吸光度最大值(图1)。氨基酸甘氨酸用作该测定的标准物质。


下一步是减小标准比色皿测定的体积并移动到多孔格式。这是由淀粉和员工和我们的实验室开创的,它发表在酿造文学中。缩小测试减少了对昂贵试剂的需求,它限制了浪费,从而实现更简单,更便宜的处理。


光谱纳米BMG L德赢vwin官网客服ABTECH将试管和微孔板测量结合在一起。集成光谱仪可以随时间采集光谱,火星数据评估软件显示所有测量结果的叠加图。


材料与方法

  • 清除96孔板从Greiner
  • 光谱纳米, 德赢vwin官网客服BMG LABTECH

pH 6.8的标准风扇测定:

茚三酮颜色试剂:4克无水Na2HPO.4.,6克kh24.在总共100毫升蒸馏水中溶解0.5克茚三酮和0.3克果糖。库存可以在琥珀瓶中冷藏2周。


甘氨酸标准股票:将107.2毫克的甘氨酸溶解在蒸馏水中,并使其精确到100毫升。标准库存可在0 - 4°C储存,以避免霉菌生长。


甘氨酸标准解决方案:用蒸馏水稀释1ml甘氨酸标准原料。该标准含有2mg氨基 - 氮/升。为每次每日测定运行新建。

稀释溶液:将2g碘酸钾(KIO3)溶于600ml蒸馏水和400ml 96%乙醇中。4℃长期稳定;使用时要接近室温,以防止试管冷凝。

测定:将1ml啤酒用蒸馏水稀释至50ml,将2ml转移至16×150mm试管。加入茚三酮颜色试剂(1mL),并将松散的管在沸水浴中加热16分钟。将管转移到冷水浴中以引起20℃(20分钟内),然后加入5ml稀释试剂,混合,并将吸光度与含有2mL水的坯料以575nm记录在575nm。样品。


PH 5.5的微孔板风扇测定


茚三酮股票解决方案:将8g茚三酮溶于300ml乙二醇中,然后加入100ml 4N乙酸钠pH 5.5缓冲液*(* 544克。醋酸钠四水合物+ 40ml冰醋酸在1L水中)。库存在室温下稳定至少6个月。


二氯化锡的解决方案:500毫克SnCl2溶于5ml乙二醇中。溶液在室温下稳定至少6个月。


茚三酮试剂/工作解决方案**:测定前,用25µL的SnCl2将溶液加入每1ml的茚三酮原液中并充分混合。

测定:将2μL(0.4μgn)的甘氨酸标准标准或2μl啤酒或葡萄汁加入到96孔微孔板中,然后加入100μlpH5.5乙酸乙酯缓冲茚三酮试剂。将板在104℃下加热10分钟。吸光度同时在光谱中以575nm处的多个样品记录纳米微孔板读者。


减少体积比粉丝测定在pH5.5时
测定:将啤酒或葡萄汁(30μl)或20μl(4μg)甘氨酸标准标准加入到200μl的pH5.5乙酸盐缓冲茚三酮试剂*(参见上面的微孔板测定)并置于沸水浴中10分钟。除去10分钟后,加入2.8mL冷水后,然后涡旋管,并在光谱中记录575nm处的吸光度纳米抵靠含有30μl水的坯料代替样品。

控制和计算
每个样品,水坯料和甘氨酸标准的试验应重复或三份。从每个样品和标准甘氨酸中减去平均空白值。然后将空白校正的样品净(平均)吸收率除以标准甘氨酸的净吸光度,并乘以2,稀释因子(50℃稀释1mL或100℃或100对于将1mL稀释至100mL的啤酒麦芽汁)以ppm获得风扇内容。[样品,包括醪样品,在稀释或离心机中,应没有雾度/碎屑。]


结果与讨论

波长优化
测量该测定的最佳波长可以通过光谱中的光谱仪的扫描能力获得纳米。通过用甘氨酸或啤酒样品从茚三羟丁反应中取出光谱(图1)。

光谱星采集的光谱纳米事实证明,在约570-575纳米下,最大吸光度最大。


完成风扇分析所需的反应时间

比较了4种不同茚三酮的风扇测定的反应时间。在已经解释的三种测定(标准风扇pH 6.8,微孔板风扇pH 5.5和减压RFAN比色皿pH 5.5中,请参阅材料和方法),研究了在6.8的pH值下的第二减去杯皿风扇测定。结果如图2所示。2。

结果表明,不同测定方法的反应速率不同。可见,标准FAN和rFAN pH 6.8反应至少需要16分钟才能接近最大吸光度。rFAN pH值为5.5,微孔板风扇试验在8分钟内达到最大值并稳定。在孵育20分钟后,任何一种检测方法的吸光度都没有下降。


结论

我们展示了席克斯塔纳米非常适合测量风扇微孔板和杯子测定的啤酒样品。新的减料量比杯皿和基于微孔板的粉丝兑换与更浓缩的茚三酮储备溶液,不需要延长的冷却时间,不需要稀释/淬火溶液。在取样之前,还没有需要在啤酒/麦芽汁样品上运行稀释。与40-50岁的标准风扇比色皿测定相比,这些都是所有优势。


在pH和缓冲液方面进一步优化测定,并且应该证明对于许多酿造,龋齿,蒸馏和食品实验室有用,用于常规测定自由或总可用氮。

去前