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使用BMG Labtech微孔板读卡器评估细胞增殖的阿拉马伯测定德赢vwin官网客服

AE Markaki. 剑桥工程大学部 06/2009
  • alamarblue.®细胞增殖测定基于降低环境,表明代谢活性细胞
  • 用BMG Labtech微孔板读卡器接下来17天内的不同底物上的细胞增殖德赢vwin官网客服
  • 可能采用荧光和比色法检测

介绍

各种方法已经被开发来测量整个细胞群的细胞增殖。这些包括通过免疫组织化学检测抗原,测量DNA合成,定量细胞还原环境。后者与以下事实有关:当细胞代谢时,它们在胞质内保持一个还原环境,这种还原状态可以通过荧光/比色氧化还原指标的转换用分光光度法测定。本应用笔记着重于alamarBlue对细胞内环境减少的量化®


在阿拉马尔菊中还原细胞的环境®测定方法是通过将雷蓝素(氧化形式)转化为雷蓝素(还原形式)(图1)。

这导致比色(吸光度)和荧光变化。Reazurin是蓝色和非荧光,而Resorufin是红色和高度荧光的。如果使用高于5x10,这是一个敏感的测定3.每100 μL细胞,相对无毒,如果仔细进行,同样的复制可以跟踪几个时间点。这种方法的缺点是它不像血球测定法那样是一种直接的细胞计数技术,因为荧光或吸光度信号会受到细胞数量和细胞代谢变化的影响。


材料与方法

  • 96孔黑色聚苯乙烯微孔板(GREINER BIO-ONE)
  • alamarblue.®(Morphosys英国)
  • 德赢vwin官网客服BMG Labtech介质读卡器

由欧洲细胞培养物ECACC的欧洲收集提供的人成骨细胞(滚刀406-05A)被接种在底物A和B上,密度为104.每个样品。将样品各自放置在24孔板的孔中,覆盖1ml培养基并孵育总共17天。培养基是含有10%热灭活血清,1%谷氨酰胺和维生素C(30μg/ ml)的McCoy的5A培养基。


为了测量细胞增殖,将种子底物孵育4小时(较长的培养时间可用于更大的敏感性),并补充有10 Vol%Alamarblue的新鲜培养基®。每个基板使用总共10个重复。


孵育后,将来自每个孔的100μl培养基转移到96孔黑色聚苯乙烯微孔板中并复制3次。在BMG Labtech微孔板读卡器上测量荧光(激发530nm,发射590nm)。德赢vwin官网客服(注意:可以通过570nm的吸光度测量来监测比色检测,同时使用600nm作为参考波长。然而,它趋于敏感,因为氧化和减少的alamarblue形式相当重叠®当通过吸光度测量时)。


艾拉马勒®通过表达为荧光发射强度单位的细胞的减少在培养期的第1,3,6,8,10,13,15和17天,用于不同样品。alamarblue的百分比减少®对于每种情况,使用公式计算

其中sx是alamarblue®样品的荧光信号在第X天,s100%减少是alamarblue的100%减少形式的信号®和s控制是来自控制的信号:培养培养基补充有10体积的10体积%。%Alamarblue®。alamarblue的100%减少形式®是通过高压灭菌对照制作的(即培养培养基补充有10体积%。%alamarblue®)121℃,15分钟。


成绩与讨论

图。图2显示了艾拉明菊的百分比®在平均并且包括标准偏差之后。大alamarblue.®在整个培养期间,观察到底物A的减少(即细胞生长水平升高)。在这两种基质中,细胞增殖在前15天随培养时间的增加而增加。在这两种基质上生长的细胞的代谢活动在第15天似乎减缓了,这表明表面正在进入融合。

结论

本应用笔记表明,可以使用BMG Labtech微孔板读卡器精确监测细胞的还原环境。德赢vwin官网客服艾拉马勒的吸引力®测定是它掺入无毒试剂,其允许使用荧光或吸光度在相同样品上连续监测细胞增殖。


德赢vwin官网客服BMG Labtech的读者是灵活的多功能胶质板读卡器,在一仪器中具有六种不同的测量模式:荧光强度,时间分辨荧光,发光,荧光极化,alphascreen®吸光度。使用两个可选的板载注射器和标准的45°C孵育室,BMG Labtech介质读卡器可以容易地完全自动化以执行任何基于细胞的测定。德赢vwin官网客服

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