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使用BD FluoroBlok™和BMG LABTECH微孔板阅读器分析前列腺肿瘤细胞侵袭性德赢vwin官网客服

Claire A. Hart Noel W. Clarke Michael D. Brown 帕特森曼彻斯特癌症研究所研究所 12/2006
  • PC3-GFP细胞用SYTO 82预标记,用BD荧光块镀覆TM值入侵腔室
  • 实时分析肿瘤细胞侵袭
  • 置于常规培养箱中的平板和BMG Labtech微孔板读卡器的可比较结果德赢vwin官网客服

介绍

前列腺转移到骨髓的机制是一个复杂的多级过程,才能开始理解。初步步骤包括对分子结合复合物的调节和产生酶如基质金属蛋白酶,导致细胞丧失细胞与肿瘤内的细胞粘附和肿瘤细胞的外渗。一旦在外周血中,循环前列腺肿瘤细胞将标准粘连并通过骨髓内皮屏障和基底膜侵入,导致形成骨转移。


传统的入侵系统是涉及洗涤的每个测定的耗时耗时,用棉花芽刮擦,去除非入侵细胞,染色,干燥和手动计数。最重要的是,该测定在流动中和有限的,因为插入物只能向研究人员呈现有一个固定的终点。BD Fluoroblok.TM值肿瘤细胞侵袭系统是一种高通量替代品。该系统是多功能和敏感的,涉及刀片的操作,从而减少劳动力和时间。它允许研究人员在引入刺激之前和之后做同一插入物的多个实时读数。插入件由染色的PET膜制成,其具有宽的波形封闭范围为490-700nm,允许使用一系列潜在的流程。该系统可以通过掺入BMG Labtech微孔板读者来自动化,以增加药物发现,细胞迁移,运动和趋化性研究的EF效率和测德赢vwin官网客服定的高吞吐量。

原理

材料与方法

肿瘤细胞入侵系统的所有组分购自BD Biosciences。

  • HTS Fluoroblok.TM值插入24孔/8μm孔
  • 24井伴板,用于9mm毛孔
  • BD Matrigel.TM值矩阵5毫升
  • BD BiocoatTM值肿瘤细胞侵袭系统
  • 24多个插入板8μm预涂层MatrigelTM值
  • 德赢vwin官网客服BMG Labtech微孔板读卡器,具有FORORECENT检测和气体通风口或大气控制单元(ACU),用于气体控制

所有组织培养试剂和SYTO 82购自Invitrogen。


Fluoroblok.TM值如图2所示制备肿瘤细胞侵袭系统。使用酚红游离RPMI 1640培养基建立所有培养物。Fluoroblok.TM值用100 μl基质凝胶包覆细胞培养插片TM值(1:25稀释,RPMI 1640), 37°C静置2小时(MatrigelTM值预涂FluoroBlokTM值可以使用插入物)。

将涂层插入涂层置于含有1mL的RPMI 1640 / 0.1%BSA的24孔伴板中,或没有化学侵入剂。在插入2x10的上半部分5.将标记的PC-3细胞的GFP或SYTO 82在0.25ml RPMI 1640 / 0.1%BSA中铺板。然后将板在37℃温育18小时,以便在BMG Labtech板读数器上拍摄侵入后的侵袭。德赢vwin官网客服对于实时入侵,将板放入BMG Labtech Reader预热至37°C和5%CO德赢vwin官网客服2通过ACU或排气口进行充气。在21小德赢vwin官网客服时内,BMG LABTECH阅读器每小时记录一次读数。


成绩与讨论

首先对氟块的人工计数和自动计数系统进行了比较TM值入侵房间。设置了两个相同的测定,手动或通过BMG Labtech微孔板读卡器进行计数。德赢vwin官网客服两个系统都提供了类似的结果(未示出)。

首先对氟块的人工计数和自动计数系统进行了比较TM值入侵房间。设置了两个相同的测定,手动或通过BMG Labtech微孔板读卡器进行计数。德赢vwin官网客服两个系统都提供了类似的结果(未示出)。


表达流荧光蛋白的细胞是在这些应用中使用的理想,因为在BMG Labtech微孔板读取器中读取时,不需要进一步操纵以便能够接收信号。德赢vwin官网客服然而,并非所有细胞都可以容易地捕获,尤其是主要细胞。通过预标记或标记后的细胞有许多替代方案来克服这一点。早期的调查表明,标签后的贴标太不可靠,因此预先标记是选择方法。预脂标记固有的问题是染料可能影响细胞功能和侵袭的风险。为此原因;需要预先建立标签时间和副作用的优化。预标记是有利的,因为它允许实时侵入研究。第一个步骤是测试BMG Labtech Plate Reader是否能够在2德赢vwin官网客服1小时内支持单元格以获得实时入侵数据。德赢Vwin安全吗PC3-GFP细胞用SYTO 82预先标记并在氟斑菌中镀层TM值入侵房间。将它们放入BMG Labtech读卡器中,其中AC德赢vwin官网客服U或气体通风口在37°C中含有5%CO的FL过夜2在空气中并设定为21小时的GFP(488/520 nm)和Syto 82(530 / 570nm)的每一小时读数。图3和4显示了BMG Labtech读者支持氟博德赢vwin官网客服德赢Vwin安全吗TM值侵入室检测持续21小时;显示类似实验的数据,将入侵室放在培养箱中(37℃/空气中5%二氧化碳)过夜,并在特定时间读取。

结论

使用带有集成气体德赢vwin官网客服通风口或大气控制单元(ACU)的BMG Labtech介质读卡器,用于读取氟氯丙烃TM值肿瘤细胞侵袭系统给出的结果与传统的侵袭试验相当。与传统的清洗、染色、干燥等步骤的入侵系统相比,所介绍的方法速度快,省时省力。


德赢vwin官网客服BMG LABTECH阅读器能够在用户定义的温度下进行多次读数,气体排气口或ACU使环境有利于细胞增殖和迁移。

FluoroBlok是BD Falcon的商标。

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