158

Bradford检测在BMG LABTECH微孔板阅读器德赢vwin官网客服上进行

Franka Gankse E.J. Dell 德赢vwin官网客服 08/2007
  • 快速均匀测定样品蛋白浓度
  • 在BMG LABTECH读卡器中的分光计工具可以跟踪染料位移德赢vwin官网客服
  • 新的易于使用的BMG LABTE德赢vwin官网客服CH评估软件

表的内容

介绍

不同的比色法被用来测定样品的蛋白质浓度。最常用的方法是Bradford法、Lowry法和BCA法。在本应用笔记中,我们演示了如何使用Bradford assay和BMG LABTECH酶标仪来测定样品中的蛋白质浓度。德赢vwin官网客服布拉德福德测定法是基于蛋白质与染料的结合,导致染料吸光度最大值的变化。建立已知浓度的蛋白质溶液的标准曲线后,就可以计算出未知样品的蛋白质浓度。用于布雷德福测定法的染料是考马斯尔染料®亮蓝色G-250(图1)。

材料与方法

  • 96孔透明的格雷纳孔板
  • 德赢vwin官网客服BMG Labtech介质读卡器
  • Sigma-Aldrich公司的牛血清白蛋白
  • Sigma-Aldrich的Bradford试剂

布拉德福德试剂已经买好了,可以使用了。制备10 mg/ml牛血清白蛋白蒸馏水原液作为蛋白质标准品。为了进行测量,从1 mg/ml开始稀释牛血清白蛋白。布拉福德试剂290 μl,移液于透明的96孔微孔板上。加入蛋白稀度液10 μl,混匀。室温孵育5分钟后,用BMG LABTECH的microplate reader的吸光度光谱仪在595 nm或光谱模式下读取平板。德赢vwin官网客服

仪器的设置

闪光的数量: 20.
Wavelenth范围: 380-800 nm(或595 nm的离散波长)
波长宽度步 1nm.

考马斯酸溶液®Brillant Blue Dye的吸光度最大为465nm。在添加蛋白质后,疏水性氨基酸残基和精氨酸残基与染料结合。结果,染料的吸光度从465nm迁移到595nm(图2)。

可以使用Current State窗口跟踪度量的进度(图3)。

此外,在测量期间,可以将所选择的阱放大并在光谱范围内获取有关测量值的信息(图4)。

结果与讨论

测量后,将数据转移到评估软件。预定定义的模板可用于执行瞬间所需的计算,即原始数据的平均值,空白校正,执行曲线非常适合。


布拉福德测定法的空白校正值用于标准曲线(图5)。

在标准曲线的帮助下,火星数据分析软件自动计算未知样品的蛋白质浓度。如果使用“路径长度校正”选项,测量数据将乘以一个因素,这取决于所使用的微孔板类型和体积。在这种计算的帮助下,数据被归一化到1 cm的路径长度,从而可以将微孔板阅读器获得的绝对数据与基于试管的光谱仪获得的数据进行比较。

结论

Bradford检测在BMG LABTECH酶标仪上成功进行。德赢vwin官网客服根据生产商的规程,该蛋白测定在0.1 - 1.4 mg/ml范围内呈线性。由于其均质性和快速性,是测定样品蛋白质浓度的首选方法。


德赢vwin官网客服BMG LABTECH的微孔板阅读器通过光谱仪工具提供了全新的可能性。每孔大约1秒就能读出整个吸光度谱。此外,新的火星数据分析软件允许在点击光谱曲线后立即识别吸光度最大值或最小值。可以选择任意波长来给出任意井的光密度值。光谱仪的速度和软件中的简单工作为用户提供了无与伦比的灵活性,可以用于优化所有实验的吸光度设置。

去前