- 在体外基于模式的基于模式的测定通过其Cox抑制功能检测NSAID
- 污水处理厂废水中药物残留的检测
- Clariostar.®微孔板读取器使用LVF单色仪测量比率探头TM值
介绍
人类药物的残留物,如NSAIDs和它们的代谢物,越来越多地发现在欧洲的城市废水处理厂(WWTP)的EF FOL。NSAIDS通过抑制环氧氢基团(COX)来减少疼痛和氨爆炸,从而产生前列腺素,例如前列腺素。NSAID靶向的COX的氨基酸序列在脊椎动物中进化地高度保守。因此,表达COX的生物似乎也可能在暴露于它们时生理学上对NSAID进行响应。对于风险评估,必须知道水生生物的程度暴露于NSAIDs以及具有相同行动模式的代谢物。因此,我们开发并验证了一种基于细胞的动作模式(MOA)测定,通过其固相萃取(SPE)富集的废水样品中的总NSAID活性可以测量为铅物质Diclofenac(Diceq)的等同物)。
测定原则

材料与方法
- CHO细胞(DSMZ-NO。ACC-110)
- 微孔板(96孔,黑底,GREINER)
- 双氯芬饼(Cayman Chemical Company)
- 花生四烯酸(σ)
- 质粒(Siz Zellkulturtechnik Mannheim)
- www.v66088.com 微孔板读卡器(BMG Labtech)德赢vwin官网客服

实验的程序
使用Fugene-HD(Promega),用遗传编码的Fl荧光氧化还原传感器谷酮氧化嗪 - (GRX-)rogfp3和COX1进行COP细胞。在选择G418和潮霉素时,将细胞膨胀,亚克隆并筛选COX1活性1。氧化还原传感器GRX-ROGFP3的COX1依赖性氧化增加了395nm / 485nm的激发杂波比,而NSAID浓度依赖性限制增加。GRX-ROGFP3-COX1传感器细胞系用于测定废水样品中的NSAID活性。使用下面指示的设置使用Clariostar板读数器进行测量。在双氯芬酸等当量(Diceq)中测量的活性。
仪器设置
视镜设置 | 荧光强度,井模式动力学 | |
顶级光学 | ||
不。的multichromatic | 2 | |
单色仪设置 | 氧化的罗格布 激励:395-15 二向色:460.2 排放:528-20. 收益:2500. |
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Recuced roGFP 激励:485-15 二向色:505.2 排放:528-20. 收益:1800 |
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焦的高度 | 4.7毫米 | |
好扫描 | 平均轨道 | 直径:4毫米 |
动力学设置 | 闪光数量 | 20. |
间隔数量 | 3(动力学窗口1) 25(动力学窗口2) |
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间隔时间 | 5 S. | |
注射 | 注射时间 | 在第4周期之后 |
注射体积 | 40µL | |
泵速度 | 430µl / s | |
注射后摇晃 | 1 s以300rpm,双轨道 |
成绩与讨论
将RogFP3和COX1表达的细胞暴露于WWTP EF FL型的rogFP率为COX1抑制的结果(图3)。

采用已知含量的铅质标准品双氯芬酸进行测定。废水样品的NSAID活性为3.5µg/l DicEQ(图4)。化学分析(LC-MS/MS)测定的双氯芬酸浓度为2.2µg/l (TZW Karlsruhe,数据未显示)。更高的非甾体抗炎药活性体外与化学分析测定的双氯芬酸浓度相比,富集了spe的废水的测定可以解释为存在更多的非甾体抗炎药。对选定的药物化合物进行化学分析,确定了废水样品中附加的非甾体类抗炎药,如布洛芬和萘普生(TZW Karlsruhe,数据未显示)。

结论
活细胞中的基于MOA的NSAID测定允许测量复杂混合物中的总NSAID活性,例如WWTP EF FOL,作为铅物质Diclofenac(Diceq)的等同物。在WWTP EF FL UNT中存在的其他NSAID抑制了COX1,如化学分析所固定的。该测定可以设计为标准方法,其中常规就业潜力在大规模监测WWTP EF FOL的情况下,它们被排入的水生环境。Clariostar.多模微孔板读卡器可靠地使用其独特检测了比率rogfp探针LVF单色器TM值。它对记录流动谱的灵活性支持NSAID测定的开发。德赢Vwin安全吗
参考资料
伯恩哈德等人。(2017)水研处Vol。115,PP。2017年5月15日74-83. DOI:10.1016 / J.Watres.2017.02.036