细胞法检测城市污水处理出水中残留的非甾体抗炎药物(NSAIDs)

介绍

人类药物的残留物，如NSAIDs和它们的代谢物，越来越多地发现在欧洲的城市废水处理厂（WWTP）的EF FOL。NSAIDS通过抑制环氧氢基团（COX）来减少疼痛和氨爆炸，从而产生前列腺素，例如前列腺素。NSAID靶向的COX的氨基酸序列在脊椎动物中进化地高度保守。因此，表达COX的生物似乎也可能在暴露于它们时生理学上对NSAID进行响应。对于风险评估，必须知道水生生物的程度暴露于NSAIDs以及具有相同行动模式的代谢物。因此，我们开发并验证了一种基于细胞的动作模式（MOA）测定，通过其固相萃取（SPE）富集的废水样品中的总NSAID活性可以测量为铅物质Diclofenac（Diceq）的等同物）。

测定原则

材料与方法

• CHO细胞（DSMZ-NO。ACC-110）
• 微孔板(96孔，黑底，GREINER)
• 双氯芬饼（Cayman Chemical Company）
• 花生四烯酸(σ)
• 质粒（Siz Zellkulturtechnik Mannheim）
• www.v66088.com 微孔板读卡器（BMG Labtech）德赢vwin官网客服

实验的程序
使用Fugene-HD（Promega），用遗传编码的Fl荧光氧化还原传感器谷酮氧化嗪 - （GRX-）rogfp3和COX1进行COP细胞。在选择G418和潮霉素时，将细胞膨胀，亚克隆并筛选COX1活性¹。氧化还原传感器GRX-ROGFP3的COX1依赖性氧化增加了395nm / 485nm的激发杂波比，而NSAID浓度依赖性限制增加。GRX-ROGFP3-COX1传感器细胞系用于测定废水样品中的NSAID活性。使用下面指示的设置使用Clariostar板读数器进行测量。在双氯芬酸等当量（Diceq）中测量的活性。

仪器设置

视镜设置	荧光强度，井模式动力学
	顶级光学
	不。的multichromatic	2
	单色仪设置	氧化的罗格布 激励：395-15 二向色:460.2 排放：528-20. 收益：2500.
		Recuced roGFP 激励：485-15 二向色:505.2 排放：528-20. 收益：1800
	焦的高度	4.7毫米
好扫描	平均轨道	直径：4毫米
动力学设置	闪光数量	20.
	间隔数量	3（动力学窗口1） 25（动力学窗口2）
	间隔时间	5 S.
注射	注射时间	在第4周期之后
	注射体积	40µL
	泵速度	430µl / s
	注射后摇晃	1 s以300rpm，双轨道

成绩与讨论

将RogFP3和COX1表达的细胞暴露于WWTP EF FL型的rogFP率为COX1抑制的结果（图3）。

采用已知含量的铅质标准品双氯芬酸进行测定。废水样品的NSAID活性为3.5µg/l DicEQ(图4)。化学分析(LC-MS/MS)测定的双氯芬酸浓度为2.2µg/l (TZW Karlsruhe，数据未显示)。更高的非甾体抗炎药活性体外与化学分析测定的双氯芬酸浓度相比，富集了spe的废水的测定可以解释为存在更多的非甾体抗炎药。对选定的药物化合物进行化学分析，确定了废水样品中附加的非甾体类抗炎药，如布洛芬和萘普生(TZW Karlsruhe，数据未显示)。