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细胞法检测城市污水处理出水中残留的非甾体抗炎药物(NSAIDs)

K.Bernhard C. Stahl R.Martens M.Frey Siz Zellkulturtechnik,C / O Hochschule Mannheim,Mannheim,德国 06/2018
  • 在体外基于模式的基于模式的测定通过其Cox抑制功能检测NSAID
  • 污水处理厂废水中药物残留的检测
  • Clariostar.®微孔板读取器使用LVF单色仪测量比率探头TM值

介绍

人类药物的残留物,如NSAIDs和它们的代谢物,越来越多地发现在欧洲的城市废水处理厂(WWTP)的EF FOL。NSAIDS通过抑制环氧氢基团(COX)来减少疼痛和氨爆炸,从而产生前列腺素,例如前列腺素。NSAID靶向的COX的氨基酸序列在脊椎动物中进化地高度保守。因此,表达COX的生物似乎也可能在暴露于它们时生理学上对NSAID进行响应。对于风险评估,必须知道水生生物的程度暴露于NSAIDs以及具有相同行动模式的代谢物。因此,我们开发并验证了一种基于细胞的动作模式(MOA)测定,通过其固相萃取(SPE)富集的废水样品中的总NSAID活性可以测量为铅物质Diclofenac(Diceq)的等同物)。


测定原则

材料与方法

  • CHO细胞(DSMZ-NO。ACC-110)
  • 微孔板(96孔,黑底,GREINER)
  • 双氯芬饼(Cayman Chemical Company)
  • 花生四烯酸(σ)
  • 质粒(Siz Zellkulturtechnik Mannheim)
  • www.v66088.com 微孔板读卡器(BMG Labtech)德赢vwin官网客服

实验的程序
使用Fugene-HD(Promega),用遗传编码的Fl荧光氧化还原传感器谷酮氧化嗪 - (GRX-)rogfp3和COX1进行COP细胞。在选择G418和潮霉素时,将细胞膨胀,亚克隆并筛选COX1活性1。氧化还原传感器GRX-ROGFP3的COX1依赖性氧化增加了395nm / 485nm的激发杂波比,而NSAID浓度依赖性限制增加。GRX-ROGFP3-COX1传感器细胞系用于测定废水样品中的NSAID活性。使用下面指示的设置使用Clariostar板读数器进行测量。在双氯芬酸等当量(Diceq)中测量的活性。


仪器设置

视镜设置 荧光强度,井模式动力学
顶级光学
不。的multichromatic 2
单色仪设置 氧化的罗格布
激励:395-15
二向色:460.2
排放:528-20.
收益:2500.
Recuced roGFP
激励:485-15
二向色:505.2
排放:528-20.
收益:1800
焦的高度 4.7毫米
好扫描 平均轨道 直径:4毫米
动力学设置 闪光数量 20.
间隔数量 3(动力学窗口1)
25(动力学窗口2)
间隔时间 5 S.
注射 注射时间 在第4周期之后
注射体积 40µL
泵速度 430µl / s
注射后摇晃 1 s以300rpm,双轨道

成绩与讨论

将RogFP3和COX1表达的细胞暴露于WWTP EF FL型的rogFP率为COX1抑制的结果(图3)。

采用已知含量的铅质标准品双氯芬酸进行测定。废水样品的NSAID活性为3.5µg/l DicEQ(图4)。化学分析(LC-MS/MS)测定的双氯芬酸浓度为2.2µg/l (TZW Karlsruhe,数据未显示)。更高的非甾体抗炎药活性体外与化学分析测定的双氯芬酸浓度相比,富集了spe的废水的测定可以解释为存在更多的非甾体抗炎药。对选定的药物化合物进行化学分析,确定了废水样品中附加的非甾体类抗炎药,如布洛芬和萘普生(TZW Karlsruhe,数据未显示)。

结论

活细胞中的基于MOA的NSAID测定允许测量复杂混合物中的总NSAID活性,例如WWTP EF FOL,作为铅物质Diclofenac(Diceq)的等同物。在WWTP EF FL UNT中存在的其他NSAID抑制了COX1,如化学分析所固定的。该测定可以设计为标准方法,其中常规就业潜力在大规模监测WWTP EF FOL的情况下,它们被排入的水生环境。Clariostar.多模微孔板读卡器可靠地使用其独特检测了比率rogfp探针LVF单色器TM值。它对记录流动谱的灵活性支持NSAID测定的开发。德赢Vwin安全吗


参考资料

伯恩哈德等人。(2017)水研处Vol。115,PP。2017年5月15日74-83. DOI:10.1016 / J.Watres.2017.02.036

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