基于细胞的测定检测城市废水处理流出物中的残余非甾体抗炎药（NSAID）

介绍

人类药物的残留物，如NSAIDs和它们的代谢物，越来越多地发现在欧洲的城市废水处理厂（WWTP）的EF FOL。NSAIDS通过抑制环氧氢基团（COX）来减少疼痛和氨爆炸，从而产生前列腺素，例如前列腺素。NSAID靶向的COX的氨基酸序列在脊椎动物中进化地高度保守。因此，表达COX的生物似乎也可能在暴露于它们时生理学上对NSAID进行响应。对于风险评估，必须知道水生生物的程度暴露于NSAIDs以及具有相同行动模式的代谢物。因此，我们开发并验证了一种基于细胞的动作模式（MOA）测定，通过其固相萃取（SPE）富集的废水样品中的总NSAID活性可以测量为铅物质Diclofenac（Diceq）的等同物）。

测定原则

材料与方法

• CHO细胞（DSMZ-NO。ACC-110）
• 微孔板（96孔，黑色底部，Greiner）
• 双氯芬饼（Cayman Chemical Company）
• 花生酸（Sigma）
• 质粒(SIZ Zellkulturtechnik mann)
• www.v66088.com 微孔板读卡器（BMG Labtech）德赢vwin官网客服

实验程序
使用Fugene-HD（Promega），用遗传编码的Fl荧光氧化还原传感器谷酮氧化嗪 - （GRX-）rogfp3和COX1进行COP细胞。在选择G418和潮霉素时，将细胞膨胀，亚克隆并筛选COX1活性¹。氧化还原传感器Grx-roGFP3的cox - 1依赖性氧化增加了激发荧光比395nm/ 485nm，而非甾体抗炎药浓度依赖性抑制了荧光比的增加。使用Grx-roGFP3-COX1传感器细胞系检测废水样品中的NSAID活性。使用CLARIOstar平板阅读器进行测量，设置如下。用双氯芬酸当量(DicEQ)测定活性。

仪器的设置

视镜设置	荧光强度，井模式动力学
	顶级光学
	多元组织数量	2
	单色仪设置	氧化的罗格布 激励：395-15 二向西：460.2 排放：528-20. 获得:2500
		被引导的Rogfp. 激励：485-15 二向西：505.2. 排放：528-20. 收益：1800
	焦点	4.7毫米
扫描	轨道平均	直径:4毫米
动力学设置	不。的闪光	20.
	间隔数量	3（动力学窗口1） 25(动力窗2)
	间隔时间	5 S.
注射	注射时间	在第4周期之后
	注射体积	40μl.
	泵速度	430μl/ s
	注射后摇晃	每秒300转，双轨道

成绩与讨论

将RogFP3和COX1表达的细胞暴露于WWTP EF FL型的rogFP率为COX1抑制的结果（图3）。

通过已知量的铅物质标准双氯芬酸验证测定。发现测定废水样品的NSAID活性为3.5μg/ L骰子（图4）。通过化学分析（LC-MS / MS）确定的相应的双氯芬酸浓度为2.2μg/ L（TZW Karlsruhe，数据未显示）。由此测量的较高的NSAID活动在体外通过进一步NSAID的存在解释了由化学分析确定的双氯芬酸浓度的测定。所选药物化合物的化学分析在废水样品中确定了含有布洛芬和萘普生的另外的NSAIDS（TZW Karlsruhe，数据未显示）。