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用CLARIOstar酶标仪检测支原体细胞培养污染

Jacob Serfass(1)Megan Young(1)Carl Peters(2) 宾夕法尼亚州立大学好时医学院德赢vwin官网客服 05/2015
  • mycoalert.TM可检测支原体对细胞培养的污染
  • 的CLARIOstar®酶标仪提供了对该发光试验的灵敏检测
  • 在每种检测中,可以对多个样品进行污染评估

表的内容

介绍

支原体是小细菌属的属,缺乏膜围绕膜1。它们具有很好的特征,作为实验室细胞培养物的污染物。它们的小尺寸使得它们难以检测到缺乏细胞壁,使它们抵抗许多常见的抗生素。


支原体污染会对细胞培养造成严重危害。它们已经被证明能引起多种细胞变化,严重的情况下还能破坏细胞系2。的mycoalert.TM该方法是一种快速、相对简单的检测支原体污染的方法。这里我们展示了CLARIOstar的实用性标仪执行该测定的敏感性检测。


测定原理

MyCoalert.TM检测是一种选择性利用支原体酶活性的生化检测方法。支原体污染是通过只在活支原体中发生的生物荧光反应来测量的(图1)。

在添加MycoAlert之前和之后分别进行发光测量TM测定底物。用合适的发光计(例如ClarioStar)量化光产生,观察样品可能具有的光发射的存在。支原体阳性样品将在基板添加后产生高发光信号,导致比例大于1的比例大于1(比率=读数在添加之前)。

材料与方法

  • 来自BMG LABTECH的CL德赢vwin官网客服ARIOstar
  • Lonza MycoAlertTM支原体检测试剂盒(LT07- 118)
  • Lonza MycoAlertTM测定控制集(LT07-518)HELA和MEF细胞系
  • Greiner 96孔,f底,白色微孔板

mycoalert.TM除50 μl样品和对照品外,均按试剂盒和对照品说明书进行测定。

CLARIOstar仪表设置

测量类型: 发光
测量模式: 板模式
不。周期: 15(暂停1&2)*
周期时间: 60年代
测量间隔时间: 1.00秒
焦高度: 11.0毫米
获得: 3500

*检测试剂制造商要求手动添加MycoAlertTM试剂。通过在循环1和循环2之间定义一个暂停,可以将此操作放入协议中。


结果与讨论

与预期的一样,在第一个循环后,添加衬底导致阳性对照样品的发光明显增加,相比阴性对照(图2)。

在MARS中计算myalert比值,方法是将第15个周期检测到的荧光除以添加底物(第1个周期)之前的周期检测到的荧光。如图3所示,降低myalert阳性对照的数量会导致预期的比值降低。

MyCoalert方案指出,阴性对照应产生<0.9的比例,而应至少看阳性对照的稀释效果1:8。使用此处所示的设置,Clariostar读数为阴性控制产生的平均比为0.09,而1:8稀释的阳性对照产生的平均比为5.4。事实上,即使稀释1:16产生了阳性结果;2.5平均比率。


最后,我们使用火星来计算来自各种细胞系的样品的MyCoalert比率。我们使用验证能力来提供良好或不好的标签,具体取决于该比率是否低于或高于1.图4显示了如何在MARS软件中描述该数据。

对所示细胞系的三次重复样本进行检测支原体污染。利用MARS数据分析软件计算出MycoAlert Ratio,当比值小于1时,可验证该比值。所有检测样品均无支原体污染。


结论

myalert方法与荧光检测相结合www.v66088.com 允许用户快速方便地检查其细胞培养物中可能存在的支原体污染。MARS的计算和验证允许用户快速识别可能被污染的样品。

MycoAlert是LONZA的注册商标


参考文献

1.美国Razin(1978)。支原体。Microbiol。启42:414 - 470
2. I.A.Sokolova等。(1998)。通过凋亡的内切核酸酶的贡献,支原体感染可以使宿主细胞敏感到细胞凋亡。免疫素。细胞生物。76:526-534

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