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使用Clariostar Microplate Reader检测支原体细胞培养污染

Jacob Serfass(1)Megan Young(1)Carl Peters(2) 宾州赫尔希医学院招收生物医学研究访问学者德赢vwin官网客服 05/2015
  • mycoalert.TM使检测细胞培养污染的支原体
  • 的CLARIOstar®微孔板读卡器提供对该发光测定的敏感检测
  • 可以评估多个样品在每个测定中进行污染

表的内容

介绍

支原体是小细菌属的属,缺乏膜围绕膜1。它们具有很好的特征,作为实验室细胞培养物的污染物。它们的小尺寸使得它们难以检测到缺乏细胞壁,使它们抵抗许多常见的抗生素。


支原体污染可对细胞培养造成严重损害。它们已被证明能引起多种细胞变化,在严重的情况下还能破坏细胞系2。该mycoalert.TM检测是一种快速和相对简单的检测支原体污染的方法。这里我们展示了克拉罗星的效用标仪执行该测定的敏感性检测。


测定原理

MyCoalert.TM测定法是一种选择性利用支原体酶活性的生化测定法。支原体污染通过仅在存活支原体中发生的生物发光反应进行测量(图1)。

在添加MycoAlert之前和之后进行发光测量TM测定底物。用合适的发光计(例如ClarioStar)量化光产生,观察样品可能具有的光发射的存在。支原体阳性样品将在基板添加后产生高发光信号,导致比例大于1的比例大于1(比率=读数在添加之前)。

材料与方法

  • BMG实验室科技公司的CLARI德赢vwin官网客服Ostar
  • Lonza MycoAlertTM支原体检测试剂盒(LT07- 118)
  • Lonza MycoAlertTM测定控制集(LT07-518)HELA和MEF细胞系
  • 格赖纳96型f型底,白色,微孔板

mycoalert.TM根据试剂盒和测定控制设定指令进行测定,除了使用50μl样品和对照。

CLARIOstar仪表设置

测量类型: 发光
测量模式: 板模式
不。周期: 15(暂停1&2)*
周期时间: 60年代
测量间隔时间: 1.00秒
焦点: 11.0毫米
获得: 3500.

*检测厂家要求手动添加MycoAlertTM试剂。通过定义周期1和周期2之间的暂停,可以将此操作放入协议中。


成绩与讨论

如预期的那样,与阴性对照相比,在第一个循环后加入母基质的发光透明增加,导致阳性对照样品的透明增加(图2)。

通过在加入衬底(循环1)之前通过在循环中检测到循环15处检测到的发光来计算MARALERTE比。如您所见,如预期的预期,您可以看到米卡尔特阳性控制的数量会降低率下降。

MyCoalert方案指出,阴性对照应产生<0.9的比例,而应至少看阳性对照的稀释效果1:8。使用此处所示的设置,Clariostar读数为阴性控制产生的平均比为0.09,而1:8稀释的阳性对照产生的平均比为5.4。事实上,即使稀释1:16产生了阳性结果;2.5平均比率。


最后,我们使用火星来计算来自各种细胞系的样品的MyCoalert比率。我们使用验证能力来提供良好或不好的标签,具体取决于该比率是否低于或高于1.图4显示了如何在MARS软件中描述该数据。

从指示的细胞系中取三份样品进行检测支原体污染。利用MARS数据分析软件计算出真菌警戒比,当该比小于1时,可以验证该比。所有检测样品都没有支原体污染。


结论

霉菌预警检测与荧光检测相结合www.v66088.com 允许用户快速和容易地检查他们的细胞培养可能的支原体污染。火星的计算和验证允许用户快速识别可能被污染的样品。

MyCoalert是Lonza的注册商标


参考资料

1.美国Razin(1978)。支原体。Microbiol。启42:414 - 470
2. I.A.Sokolova等。(1998)。通过凋亡的内切核酸酶的贡献,支原体感染可以使宿主细胞敏感到细胞凋亡。免疫素。细胞生物。76:526-534

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