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使用配备acu的微孔板读卡器的弯曲杆菌的生长

R.D. Haigh J.M. Ketley 莱斯特遗传学大学 08/2011
  • 使用微丙烯酸氢化物的生长弯曲杆菌作为模型
  • 用ACU仪器中试管孵化器中生长的比较
  • 独立氧和二氧化碳调节允许不同细胞类型的最佳生长条件

介绍

弯曲杆菌是革兰阴性微嗜血硅生物,是哺乳动物和鸟类的常见共生,是全球人体细菌肠炎中最常见的均衡剂之一。人类感染经常与煮熟的家禽的消耗有关,并且通常在少数病例中可以是自我限制的,导致严重的并发症如Puillain-Barre综合征。虽然在肠道患者粪便样本中观察到类似的螺旋形生物多年,但弯曲杆菌jejuni当制定新的培养方法时,才与1970年患者恰当地与疾病相连。C. Jejuni具有相当严格的增长要求,即;富含营养肉汤,温度为37-42°C,微苯胺条件,即氧气降低至5-8%,二氧化碳升高至10%。有人建议,这些条件密切地模仿了细菌在野外适应的禽类宿主的肠道中的条件。

历史上在我们的实验室Campylobacter Jejuni.在15ml管中保持在42℃的15ml管中的摇动液体培养物中进行了生长研究,其中7%O2和10%的co2在可变气氛培养箱(虚空)柜中;然后将这些暂时从培养箱中移除,以定期采用光学密度读数。这种方法有几个限制:样品必须在采样所花费的时间内暴露于实验室大气条件和温度;缓慢的倍增时间C. Jejuni意味着需要在24小时内采取理想的样品;并且存在对样品数量的物理限制,并重新复制,可以在虚空中轻松处理。


这里描述的是一个比较C. Jejuni使用传统的管道方法在vain中摇动的传统方法进行,其使用与配备有大气控制单元(ACU)的BMG Labtech板读数器以96个孔微孔板格式完成,以独立控制氧气和二氧化碳。德赢vwin官网客服


材料与方法

  • 清除平底96孔组织培养板(Nunc)
  • 透气预刺穿封口机(FluidX)
  • 来自BMG Labtech的微孔板读者与大气控德赢vwin官网客服制单元(ACU)

全部弯曲杆菌培养物在Mueller Hinton Brooth(MHB)或穆勒林琼琼脂(MHA)板上(Sokoid)。在这些最终浓度下加入抗生素:万古霉素,10μg/ ml;Trimethoprin,5μg/ ml。细菌培养物生长在无菌弯曲的15ml聚丙烯管中。


Vain方法:
从-80°C冷冻液中回收菌株,进入含有Trimethoprin和万古霉素(VT)的MHA板,并在徒靠(Whitley VA1000工作站;在42°C下在10%CO的42°C下生长过夜27%o2。用生长的平板搭扣并重新镀到新鲜的MHA板上,根据需要含有适当的抗生素,并在Vain中重新孵育过夜。这些板培养物用于接种5ml MHB(+ VT)起始培养物,然后在难以捕获的情况下以摇动(50rpm)孵育过夜。测量每个起始培养物的光密度(600nm),然后在新鲜MHB + VT中相应地稀释培养物,得到最终的OD6000.01(通常为50-80倍稀释)。


为每种菌株制备8ml中8ml的三甲酸盐培养物,并在50rpm处置于难以摇动。每隔几个小时从Vain中除去培养物,采取小样品,使用比色皿和分光光度计测定600nm处的光密度。

使用BMG 德赢vwin官网客服Labtech酶标器具有大气控制单元:
使用与上述相同的方法在Vain中产生起始培养物,并且在新鲜MHB + VT中稀释菌株以使培养物与OD6000.01。将多个200μl等分试样的稀释培养物接种到96孔微孔板的个体孔中 - 对于这些实验,我们使用6个技术复制和每种菌株的两个MHB坯料。然后用气体可渗透的预刺穿密封件密封板,以便将刺穿的狭缝远离孔的中心定位以避免干扰吸收测量。


然后将板在42℃下在微孔板读卡器中孵育,大气控制单元设置为独立控制O.2到7%和CO2到10%。氧自由氮和二氧化碳瓶在30psi下连接。测量600nm的吸光度(20次闪光/循环),为30分钟的40分钟,在测量之间不断摇动(双轨道),在500rpm之间的持续振动(双轨道)。

成绩与讨论

典型的生长曲线弯曲杆菌在徒劳的管中生长如图1所示。

生长通常在呈指数上生长到OD之前呈现4-5小时的滞后阶段600取决于菌株的最大值为0.5-0.6。增长弯曲杆菌96孔板格式的菌株在微孔板读取器中孵育,具有大气控制单元如图2所示。

在微孔板格式的生长期间表现出的滞后阶段似乎略长于管中,但是生长曲线非常相似,24小时后获得的最大生长水平是相当的。


编程的自动数据收集提供了在较长时期测量增长曲线的能力,常规间隔具有读数。这产生了在比较响应中的微妙之处时具有更重要的增长曲线。

控制两种气体的能力独立地提供了快速且简单地在不同条件下测试生长的能力。此外不同的O.2和co.2浓度可用于其他微生物,沙门氏菌奈梅里亚等等,无需改变气体或连接定制气体混合物。仅以多平行方式执行和监测生长的能力为我们提供了快速进行分析多种弯曲杆菌菌株的多个突变体的增长研究的能力。另外,在不同的氧化条件下能够在不同的氧化条件下工作的增加的潜力将使我们承担比较的生长实验,这是由于在一个虚拟机柜中拥有多个用户的限制而导致的比较增长实验。


结论

比较增长弯曲杆菌在将管道中孵育的管中孵育至96个孔板中的那些,在微孔板读卡器中,具有大气控制清楚地表明,这种棘手的生物体的生长可以转移到96孔格式。通过设计BMG Labtech仪器提供温度控制并与大气控制单元一起振动,这使得德赢vwin官网客服这是简单的,便于对o的独立控制2和co.2在读者

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