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使用BMG Labtech微孔板读卡器的细菌生长动力学的高通量测定德赢vwin官网客服

Mark A Webber Laura JV Piddock 伯明翰大学免疫和感染科 05/2006
  • 测定并比较了沙门氏菌及其亲本耐药突变体的生长速度
  • 在24小时内自动监测生长曲线
  • 杀菌剂暴露选择对杀菌剂耐受性较高的菌株,没有明显的适应度成本

介绍

Salmonella肠道塞洛瓦尔刺血管蕈下是胃肠道疾病的主要原因。沙门氏菌中的多种抗生素抗性(MAR)一直在增加,超过了S.培氏毒蕈类的分离物的30%以上。Efflux is one mechanism that can confer MAR, efflux pumps are membrane proteins that actively export a wide range of toxic substrates including antibiotics, dyes and biocides to the cells’ external environment, thereby preventing accumulation of toxic agents and mediating resistance to these agents as a result.


由EF FL UX系统识别的广谱谱系引起了顾虑担心将细菌暴露于一个基底,可以选择EF FL UX系统的过表达并因此对所有其他基材的抵抗力。将细菌暴露于杀生物剂可能导致选择EF FL UX突变体,其降低了对抗生素的易感性,其目前尚未遇到过。在该研究中,选择抗杀生物剂的沙门氏菌的突变体。测定杀灭菌突变体的生长速率并与亲本菌株进行比较,并测定在生长期间添加杀生物剂的效果。

材料与方法

杀菌剂抗性突变体的选择
以前,一个小组Salmonella typhimurium.用于选择杀菌剂抗性突变体。SL1344用作参考控制菌株,L108是缺乏Tolc Porin的SL1344的衍生物,L358是多种抗生素抗性DT104分离物。L378是来自家禽的CiPro-Fl氧化酸抗性分离物,L357是代表性DT104分离物。使用杀生物剂Aqas(季铵化合物),超基金(醛混合物),农场流体S(焦油和酚类混合物)和virkon s(过氧生成化合物)通过掺入琼脂并选择耐受性突变体用每个菌株接种后孵育过夜。


耐杀菌剂突变体生长动力学分析

在37°C条件下,使用BMG LABTECH酶标仪测定24小时的生长率。德赢vwin官网客服将100 μL无菌LB肉汤滴入96孔无菌培养基中,接种于各菌株过夜培养,最终接种量为4%。在24小时内,每隔10分钟记录每孔在微孔板上的吸光度(以600纳米扫描)。每个应变在至少3个独立的情况下在3个重复井中进行分析,得到9个数据集供分析。此外,每株菌株在生长两小时后分别用0.5 X或选择性杀菌剂的最低抑菌浓度(MIC)对亲本进行挑战,以确定每种杀菌剂对突变体的抑制能力是否相对于亲本菌株有所降低。


成绩与讨论

没有杀菌剂选择的突变体在其生长的能力中受到损害。在不存在杀生物剂的情况下衍生自L358(S2,S22,S23)衍生自L358(S2,S22,S23)的突变体在L358中长得多,在没有杀生物剂(图1)。

大多数杀生物剂选择的突变体对培养基添加到培养基中的抗杀菌剂比它们的各自的亲本菌株更耐药,包括与父母(表1)相比,选择性杀生物剂的MIC保持不变的那些菌株(表1)。AQAS所选突变体A27和A26能够在介质(FI Gures 2和3)中,在L378和L108的加入0.5×和LiC中,更好地生长显着(p> 0.01)。

Virkon选择的突变体V6和V7在0.5倍或Virkon对L354的MIC攻毒时,都比L354显著增长(p > 0.01)(图4)。

农场之间没有显著差异观察流体年代选择突变体F1和F2及其父L357杀虫剂免费汤或暴露在0.5 X的麦克风农场流体S .然而这两个突变体增长显著(p > 0.05)更好的挑战时麦克风农场流体的最终浓度(0.1%和0.2%),如图5所示。

表1:亲本品系以粗体表示,突变体列于亲本下面。与它们的亲本相比,对杀菌剂抗性增强的突变体用红色表示。

麦克风(%)
应变和基因型 有选择性的代理 virkon. 超基 aqa FFS.
L357(DT104'A') 0.4 0.025 0.1 0.2
F1 FFS (1 x麦克风) 0.2
F2 FFS (1 x麦克风) 0.2
L378(CIPR VLA52) 0.4 0.025 1.6 0.2
A27 > 3.2
L108(TOLC :: APH来自SL1344) 0.4 0.006 < 0.003 0.025
A26 aqa (2 x麦克风) 0.12
L358(MDR DT104) 0.4 0.025 1.6 0.2
S2 s'kill(1x mic) 0.025
S22 s'kill(2x mic) 0.025
S23 s'kill(2x mic) 0.025
SL1344 0.4 0.025 0.1 0.2
v6. v'kon(2x mic) 0.8
v7. v'kon(2x mic) 0.8

结论

该数据清楚地表明杀生物剂暴露为亚麦麦麦麦浓度和麦克风的耐杀菌剂的耐受性增加,并且与杀生物剂自由肉汤的父母相比,这些菌株中没有明显的含量。

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