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高吞吐量ELISA准备在90分钟内分析:384 - Simplestep Elisa与Pherastar FSX

杰米坎贝尔(1)奥利弗卡尼(2) (1)Abcam,剑桥,英国(2)BMG Labtech,德赢vwin官网客服英国Aylesbury 01/2021
  • 单清洗90分钟的ELISA,具有高灵敏度,特定城市和再现性
  • 提供384孔格式,以满足高吞吐量用户需求
  • IFNγ和IgG测定在Pherastar上阅读FSX.使用高精度协议

介绍

经过40多年的时间后,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)仍被认为是最可靠的测定之一,通常被认为是金标准,用于检测和量化蛋白质和各种生物学中的其他分析物样品。传统的ELISA方法需要几个洗涤步骤和相对长的转弯时间(3-5小时)以及高样本量,使其更具挑战性,适应高通量过程。


ABCAM的Simplestep ELISA技术将过程简化为半同质形式,导致简单的90分钟单洗谱协议1。为了更高的吞吐量需求,Simplestep ELISA可以小型化为384孔格式,允许在相同的时间内加工多达4倍的样品。在BMG Labtech阅德赢vwin官网客服读时Pherastar.FSX.达到较高的吞吐量,同时保持高灵敏度,在一秒钟内读取每个孔。德赢vwin官网客服BMG Labtech火星数据分析允许自动产生定量标准曲线和未知样品的定量。


在这里,我们描述了如何Simplestep Elisa以384井格式可以与pherastar一起使用FSX.为了量化人IgG和人干扰素γ(IFNγ),药代动力学研究和免疫治疗药物安全测试的两个重要靶标。

测定原则

夹心ELISA使用与分析物的不同部分结合的抗体对。一抗涂覆井的底部并用于捕获分析物。在捕获和必需洗涤之后,加入探测器抗体。最后,在额外洗涤之后,可以进行检测。


图1显示了简单的ELISA技术如何通过添加固定抗体来半同质地进行夹心ELISA。无论是以96-或384孔板格式执行,简单的90分钟协议保持相同。

材料与方法

  • 384- Simplestep Elisa Microplate(AB203359)
  • Simplestep Elisa Kits(Abcam)
    • 人体IgG ELISA套件(AB195215)
    • 人类IFN伽玛ELISA套件(AB174443)
  • Pherastar.FSX.(德赢vwin官网客服BMG Labtech)

实验程序
对于所有套件,样品按照384孔格式的使用说明处理,总体积为50μl2。需要两个96井简单的ELISA包,以运行完整的384孔板。对于所有测试,基于使用重复或三份样品的7点稀释系列制备标准曲线。


将平板与3,3',5,5'-四甲基 - 苯并丁丝(TMB)一起孵育10分钟,用于人IgG,5分钟用于人IFNγ。在Pherastar上阅读板块FSX.使用高精度协议和以下设置。


仪器设置

视镜设置 吸光度,终点
波长 450.
通用设置 闪光数量 22.
建立时间 0.2 S.

成绩与讨论

在Pherastar上阅读每个板后FSX.在火星中分析数据以绘制标准并应用曲线。


人IgG的测量是抗体表达研究中使用的重要指标。人IgG SimpleStep ELISA试剂盒在血清,血浆,细胞培养上清液和组织裂解物中验证。它对药代动力学(PK)研究特别有用。以384孔格式测量的IgG ELISA如图2所示。

人IFNγ是评估T细胞反应的关键因素,其中许多与癌症和免疫肿瘤中非常重要的免疫突触有关。这种测定的实例是混合淋巴细胞测定(MLR),T细胞共刺激或召回测定。人IFNγSimpleStepELISA试剂盒在血清,血浆和细胞培养上清液中验证。图3中描绘了384孔ELISA测量。

结论

SimpleStep ELISA试剂盒中的384孔微孔板格式,允许在较小的样品体积(50μL)上加入多达4倍的样品和产生结果的产生。简化的高灵敏度,特定城市和再现性预期的384孔格式。节省时间的协议属性,耦合与相关的成本节省,使得这一唯一埃莉莎解决方案适用于高吞吐量需求。


Pherastar的光谱仪的吸光度测量FSX.允许在每孔不到秒的时间内测量一个或多个波长,通过BMG Labtech的MARS数据分析包的标准曲线和重新计算未知样本的标准曲线和重新计算,增加了通过更简单的工作流程所实现的节省时间。德赢vwin官网客服


参考资料

1.高度敏感的ELISA在90分钟:Simplestep Elisa®套件和光谱®Nano -德赢vwin官网客服bmg Labtech应用笔记341
2. 384- Simplestep Elisa®微孔板协议。
3. Huse M等人。T细胞使用两个方向异性不同的途径进行细胞因子分泌。NAT IMMUNOL。2006年MAR; 7(3):247-55

Simplestep Elisa是ABCAM的注册商标。

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