341.

90分钟内高度敏感的ELISA:Simplestep Elisa Kits和Spectrastar nano

Mallori Milligan(1)Scott Detmer(1)Carl Peters(2) (1)Abcam,剑桥,英国(2)BMG Labtech,德赢vwin官网客服Cary,NC 10/2019
  • 单洗方案可减少测定时间,但保持高灵敏度,特定城市和再现性
  • 使用Spectrastar.纳米和MARS数据还原软件,简化分析检测和分析

介绍

自1970年代早期的介绍以来,酶联免疫吸附试验(ELISA)已成为最可靠,依赖于生物化学测定的一种1。检测分析物的存在(和数量)已经证明了一种可宝贵的工具作为医学诊断或跨越每个生物学科的基础研究。


ELISA方法的主要缺点一直是相对较低的吞吐量和多个洗涤步骤的TEDIUM,通常需要3-5小时。Abcam SimpleStep ELISA的®技术通过将过程简化为半同质形式来解决这些问题,从而导致一个简单的90分钟单洗方案。


在这里,我们描述了这种创新的ELISA的检测SPECTROstar纳米。当与火星数据分析结合时,您将以最快,最简单的方式获得最大的结果。


示例显示了三个重要目标的数据:

  • 人Pro-Collagen Iα:蛋白质是I型胶原蛋白的组分,其在骨骼和软骨中发现。因此,它涉及以脆弱的骨骼为特征的疾病,例如骨质发生不完全或骨质疏松症。
  • 人IL6:白细胞介素6(IL6)是一种氨态细胞因子,其能够诱导B细胞和发烧的成熟。因此,它通常用作在FL Ammation标志物中。
  • GFP:绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,简称GFP)的特点是在蓝光激发下能发出绿色光谱的荧光。当它与我们感兴趣的蛋白质结合时,它是一种流行的蛋白质。

测定原则

夹心ELISA使用一对抗体结合分析物的不同部分。一种抗体覆盖在井的底部,用来捕获被分析物。捕获和必要的洗涤后,加入检测抗体。最后,在附加洗涤后,即可进行检测。


图1显示了Simplestep Elisa®技术使夹心ELISA能够通过添加固定抗体来半同质地进行。

材料与方法

  • SPECTROstar纳米
  • Simplestep Elisa.®
    • 人体胶原蛋白I alpha 1 Elisa套件(AB210966)
    • 人体IL-6 ELISA套件(AB178013)
    • GFP ELISA套件(AB171581)

实验程序
对于所有套件,样品按照说明处理2。所有测试,标准曲线是根据8点稀释系列使用重复样品。前胶原1 α和IL-6使用了2倍稀释系列,起始浓度分别为2000和500 pg/mL。GFP采用3倍稀释系列,起始浓度为2000 pg/mL。采用生物复制法测定试验的重复性,包括2种不同稀释的人血清检测I -前胶原蛋白,2倍稀释的刺激的外周血单核细胞(PMBC)上清检测IL-6, 143B细胞添加500和250 pg/mL的GFP。


车牌是在光谱仪上显示的纳米使用以下设置:

仪器设置

视镜设置 吸光度谱,终点测试
波长范围(步宽) 400-700(2)NM
通用设置 数量的闪光 45.
建立时间 0.2 S.

成绩与讨论

德赢vwin官网客服BMG Labtech介质读卡器配备有用于吸光度检测的光谱仪。频谱数据的集合可以在读取单个波长的同时进行。这允许简单地评估数据质量(图2)。MARS数据分析模板允许自动波长选择,包括峰值,噪音和参考波长,用于额外的计算,该计算也由系统自动执行。

图3显示了来自SimpleStep ELISA的数据®套件符合建议的4个参数。对于所使用的所有三个套件,可以看到至少0.9995的R2。

表1显示了为所有3个套件计算的灵敏度和再现性度量的结果。这些结果表明Simplestep Elisa®试剂盒不牺牲性能,同时提高易用性,只需要比典型ELISA试剂盒三分之一的时间完成。


表1:SimpleStep ELISA试剂盒®敏感性和测定精度
MDD(最小可检测剂量)=可重新计算的AVGBLANK + 2 * SD浓度空白。空白(n = 15),生物重复(n = 8)。

MDD(pg / ml) %cv的空白 生物复制的%CV 生物复制的%CV
Pro-Collagen. <8.1. 4.7 1.3 3.3
GFP. 1.16 4.4 3.8 7.6
IL-6. <1.99. 8.4 3.8 3.4

结论

Simplestep Elisa.®套件提供出色的敏感性和性能,同时节省了时间和努力。用光谱读微孔板纳米提供了显着的数据质量,同时提供将数据分析链接到火星模板的便利性,即立即和准确的结果。

参考资料

1. Lequin,r.m.酶免疫测定(EIA)/酶联免疫吸附试验(ELISA)。临床。化学。(2005)51:2415-2418。
2. Simplestep Elisa.®套件:www.abcam.com/kits/simpleStep-elisa-kits.

去顶级