251

蛇毒库中新的血红蛋白修饰活性的鉴定

Paul Hayter(1)Anthony Baines(2)洛林凉筒(3)凯瑟琳蜡(3)史蒂文饰边(1) (1)Venomtech Ltd.(2)肯特大学(3)BMG Labtech德赢vwin官网客服 05/2014
  • 蛇毒液对肝脏有巨大的影响
  • 德赢vwin官网客服BMG Labtech介质读卡器用于筛选VenomTech的T-VDA简历蛇毒数组
  • 发现了新的血红蛋白修饰活性

表的内容

介绍

人们早就知道毒液,尤其是蛇的毒液能影响猎物和人类受害者的止血作用。先前发现的毒液活动包括:血栓形成,溶血,低血压,水肿和出血。然而,关于毒液对哺乳动物血红蛋白的直接影响的知识在文献中非常罕见,而且仅限于嗜血动物的唾液。为了进一步探索毒液活性的本质,作者开始筛选心血管毒液发现阵列(T-VDA)简历)对止血的影响,使用简单的384孔分析,使用基于光谱仪的酶标仪。


材料与方法

  • 绵羊血液(Harlan Laboratories)
  • 兔血(肯特大学)
  • 清除384孔板(Greiner)
  • 心血管-毒液发现阵列(T-VDA)简历
  • 基于光谱仪的微孔板读取器(BMG Labtech)德赢vwin官网客服

羊血或兔血加入两体积蒸馏水裂解,离心澄清。粗蛇毒(30 mg/ml)取自Venomtech T-VDA简历阵列。


表1:蛇毒取自以下蛇类。

Viperidae家庭 简式 Elapidae家族 简式
比提gabonica犀牛 B.grh 眼镜蛇nigricollis n.nig.
蕲蛇contortrix contortrix A.cco Aspidelaps lubricus A.LLU.
Atheris Squamigera. A.Squ .. Dendroaspis polylepis D.pol
克罗塔卢萨斯塔巴斯基州 C.BAS. Pseudechis rossignoli P.Wei.
Cryptelytrops purpureomaculatus T.pur

将粗毒液匀浆或用磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释后,与等体积的兔血(匀浆)或羊血(PBS中1:2稀释)混合,终测体积为20 μl。绵羊血被稀释以产生与兔血相当的吸光度读数。板在酶标仪中30°C孵育,并在16小时内每隔30分钟读取吸收光谱(400-700 nm)。

成绩与讨论

在没有蛇毒的情况下,兔血在540 nm和570 nm处有吸收峰,这是氧合血红蛋白(HbO)的特征2),在30℃孵育16小时后光谱保持不变(图1)。


当与某些蛇毒液孵育时,特别是来自Viperidae家族的蛇形毒液,吸光度专业版的速度明显,减少了HBO2吸光度峰和在500 nm和630 nm处出现的峰,氧化血红蛋白(methaem红蛋白)的轮廓特征。在这个实验中,眼镜蛇科的成员通常表现出很少的活性,但在黑颈吐眼镜蛇毒液的存在下,吸光度曲线出现了可察觉的变化,眼镜蛇nigricollis。进一步分析n nigricollis使用溶解绵羊血(在PBS中1:2稀释)的毒液,与典型的HbO相比,其吸光度曲线显示出明显的时间依赖性变化2对于甲状腺蛋白的一种特征(图2)。

基于凝胶的测定表明,这种光谱偏移不是由于血红蛋白蛋白质(数据未显示)。它也值得注意的是,在存在中氧化血红蛋白n nigricollis添加还原剂(1毫米或5毫米的二硫苏糖醇)并不能阻止蛇毒,而对蛇毒进行热处理(65°C或95°C)会导致活性丧失(数据未显示)。综上所述,这些数据表明血红蛋白的氧化,可能是酶介导的,代表了新的血红蛋白修饰活性的毒蛇和蛇毒。

结论

使用血红蛋白的光谱分析的简单测定揭示了蛇毒液中的新型血红蛋白改性活性,而这种效果在Viperidae家族中的毒液中最为明显,至少一个Elapid Snake,n nigricollis也表现出这项活动。


来自BMG LABTECH的微孔板阅读器促进了一个简单德赢vwin官网客服的384孔分析的设计(通过波长扫描),揭示了蛇毒库中的新活性。

去顶级