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使用SimpleStep ELISA试剂盒和SPECTROstar Nano进行高灵敏度和快速的免疫肿瘤学生物标志物测量

Mallori Milligan (1) Scott Detmer (1) Carl Peters (2) (1) Abcam, Cambridge, UK (2) 德赢vwin官网客服BMG LABTECH, Cary, NC 06/2020
  • 确定生物标志物的表达对于优化免疫肿瘤治疗至关重要
  • SimpleStep ELISA®Abcam的试剂盒提供了数百种癌症相关标志物的检测工具
  • 光谱®纳米简单的数据收集,结果使用MARS数据分析快速实现

介绍

基于患者免疫反应的癌症治疗在临床中已经取得了令人印象深刻的结果。尽管取得了这些成功,但仍有一个重要的需求未得到满足,因为很大比例的患者要么对现有药物没有反应,要么对现有药物产生耐药性。开发更有效的治疗方法需要更好地了解癌症免疫逃避策略1以及临床结果的预测生物标志物的识别或目标接合的药效学标志物。总之,这有潜力为个人量身定制治疗方案和优化治疗方案。


这里我们描述了SimpleStep ELISA的成功实现®检测3个相关生物标志物的试剂盒:编程死亡配体1(PD-L1)Interleukin-8(引发),干扰素(IFN -γ)。由于该途径作为免疫检查点的作用,靶向编程死亡1(PD-1)/ PD-L1途径的治疗已经取得了成功。除了免疫调节器作用之外,肿瘤中PD-L1的表达水平,以及在某些情况下,免疫细胞,与阻断该途径1的临床结果相关。此外,IL-82和干扰素-γ3.已经证明PD-1/ pd - l1靶向治疗可调节其表达。


测定原则

Simplestep Elisa.®提高了已建立的ELISA平台,提供了一种半同质方法,可节省时间和精力(图1)。

材料与方法

  • 光谱®纳米
  • SimpleStep ELISA®套件
  • 人类PD-L1(AB214565)
  • 人体IL-8(AB214030)
  • 人类干扰素-γ(ab236895)

实验程序
样品全部根据试剂盒指令处理,包括8分标曲线,重复,具有2倍的稀释系列。PD-L1,IL-8和IFN-γ的开始浓度分别为1100,250和800pg / mL。采用空白和适当的生物重复,用于评估测定的再现性。


人类PD-L1(AB214565)
生物复制使用的是人血清,人血清中添加PD-L1,和外周血单个核细胞(PMBC)培养的上清,该培养经历了有丝分裂刺激方案与植物血凝素m (PHA-M)促进细胞因子的表达4.


人体IL-8(AB214030)
从PHA-M刺激的PMBC培养物中使用两种不同的上清液作为生物重复。

人类干扰素-γ(ab236895)
生物复制是稀释PHA-M刺激的PMBC培养上清。


使用分光星进行吸光度检测后,使用数据分析模板在火星上进行数据分析(4参数曲线拟合,R2计算,最小可探测剂量(MDD)计算,%CV测定)®纳米。使用以下设置进行检测:


仪器的设置

光学设置 吸收光谱,终点测试
波长范围(阶梯宽度) 400 - 700(2)海里
一般设置 闪光数量 45
建立时间 0.2 S.

成绩与讨论

所有SimpleStep ELISA试剂盒都显示了高数据质量和重复性结果。图2显示了人PD-L1 SimpleStep ELISA数据的显著相关性®试剂盒中4个参数配合,根据R2值。MDD具有与试剂盒文献报道的值相似的高灵敏度,所有生物复制和空白显示低变异,%CV小于5。

MDD(pg / ml) 毛坯的CV % (n=16) %的简历bio-replicates
50%的人类血清
(n = 8)
50%人血清+ 500
pg / mL PDL1 (n = 8)
50%的刺激。PBMC
文化一口。(n = 8)
< 4.5 4.6 4.3 3.1 2.7

人IL-8 SimpleStep ELISA试剂盒的结果如图3所示。标准曲线与基于R的4参数配合相关2MDD与套件文献一致。BIO复制均显示出非常低的可变性,%CV小于4,而坯料%CV小于5。

图4为人IFN-γ SimpleStep ELISA检测结果®套件。标准曲线与套件文献一致的4个参数文件和MDD相关联。该测定的坯料和生物重复显示出非常低的变化(%CV <4)。

MDD (pg / mL) %cv的空白
(n = 15)
%的简历bio-replicates
甜点。PBMC文化支持。
25% (n = 8)
甜点。PBMC文化支持。
12.5% (n = 8)
5.5 3.4 1.9 1.4

结论

本研究证明了simple - step ELISA的能力®套件,与Spectrastar一起使用时®纳米和MARS数据分析,提供快速、简便的预测和药效学免疫肿瘤生物标志物检测,以更好地了解癌症免疫逃避策略,并允许为患者开发个性化、优化的治疗方案。


参考资料

1.阿拉德等人。Semin。癌症医学杂志。52(2018): 1 - 11。Doi: 10.1016 / j.semcancer.2018.02.005
2.Sanmamed, M.F.等人。安。肿瘤防治杂志。28(2017): 1988 - 1995。Doi: 10.1093 / annonc / mdx190
3.倪琳,卢杰。(2018)7:4509-4516。Doi: 10.1002 / cam4.1700。
4.沙利文,K.E.等等。Clin Diage Lab Immunol(2000)7:920-924 DOI:10.1128 / cdli.7.6.920-924.2000

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