通过双发射AlphaLISA-AlphaPlex检测和同时双发射检测增加吞吐量

介绍

为了最大限度地提高EF效率，筛选设施必须不断努力提高吞吐量并尽量减少采样支出，同时尽可能控制成本。但是，如果最终数据受到影响，则节省时间，样本和金钱是无关紧要的。

在这里，我们展示了Pherastar的表现FSX在AlphaLISA型检测中使用2发射荧光团。PHERAstar的能力FSX为了执行该测定的同时双发射检测，将允许用户在运行标准字母表板的相同时间中从每个井中获得的信息加倍。

测定原则

Alphalisa原理表现得很好，并且先前在BMG Labtech应用笔记AN260中描述了Pherastar系列的性能。德赢vwin官网客服最近，修正的Alphalisa已经可用，其通过与传统的615nm相反的峰值545nm的发射波长。因此，现在可以在同一井中一次监测2个不同目标的量的变化（图1）。

发射波长都可以与Alphalisa SDE光学模块同时测量。

材料与方法

• 链霉抗生物素蛋白alpha供体珠
• alphalisa.^®接受者珠子
• AlphaPLEX^TM值545个受体珠子
• 纯化蛋白（靶1＆2），抗体
• 帕卡德约板F, 384孔，黑色
• Pherastar.FSX

选择两种蛋白质靶标的抗体对。对于每个蛋白质靶标，将配对抗体中的一种与αplinple缀合^TM值545nm受体珠（蛋白质靶1）或alphalisa^®接受者珠子。每对的其他抗体是生物素化的。

对于试验，从起始浓度为256μg/ ml制备蛋白质靶1的两倍倍数稀释。制备用缓冲液或128μg/ ml靶蛋白2混合不同浓度。制备类似的稀释系列靶蛋白2并用缓冲液或128μg/ ml靶蛋白1。

制备含有对靶蛋白的受体珠粒和生物素化抗体的混合物并加入到反应板中。在约1小时的孵育期后，将供体珠的溶液加入到反应板中。在供体珠后，在仔细阅读之前，在室温下将反应板在室温下孵育约1小时FSX使用标准AlphaLISA模块(Em: 615 nm)或AlphaLISA SDE模块(EmA: 615 nm, EmB: 545 nm)。

Pherastar FSX仪器设置

焦点：	8.0毫米
光圈勺：	384年好
安定时间：	0.1秒
激发时间：	0.26秒
集成开始：	0.28秒
积分时间:	0.12秒

成绩与讨论

首先，我们觉得有必要核实特征良好的AlphaLISA^®当alphalisa时，结果不会受到损害^®使用SDE模块。图2和表1比较了两种模块在分离平板上检测蛋白靶标2的性能。

表1：使用Alphalisa标准光学模块或使用Alphalisa SDE光学模块获得的测定参数

	alphalisa.®	alphalisa.®SDE.
信号/空白*	138.1	124.8
z-prime * *	0.797	0.863

*蛋白信号为256µg/ml(无蛋白对照)
以蛋白256µg/ml为阳性对照，无蛋白对照为阴性对照

可以看出，SDE模块表现出了与传统AlphaLISA相当的性能^®模块。

接下来我们希望调查如果在井中存在第二信号，则可能会发生可能发生的检测。为了在靶蛋白2的存在下接种靶蛋白1的最终稀释液。随后用甲基SDE模块读出平板。如图3所示，在615通道中，尽管高水平的信号在615声道中，545中的信号检测是不妥协的。

类似地，我们希望评估任何可能的效果，即545nm信号可能对615nm信道中的检测有所存在。图4中的结果表明，存在545nm信号的存在不会影响615nm信号的检测。