通过双发射阿尔法检测和同时双发射检测提高吞吐量

介绍

为了最大限度地提高EF效率，筛选设施必须不断努力提高吞吐量并尽量减少采样支出，同时尽可能控制成本。但是，如果最终数据受到影响，则节省时间，样本和金钱是无关紧要的。

这里我们展示pherstar的性能FSX用2个发射荧光团检测阿尔法虫型。pherstar的能力FSX为了执行该测定的同时双发射检测，将允许用户在运行标准字母表板的相同时间中从每个井中获得的信息加倍。

测定原理

Alphalisa原理表现得很好，并且先前在BMG Labtech应用笔记AN260中描述了Pherastar系列的性能。德赢vwin官网客服最近，修正的Alphalisa已经可用，其通过与传统的615nm相反的峰值545nm的发射波长。因此，现在可以在同一井中一次监测2个不同目标的量的变化（图1）。

两种发射波长都可以用AlphaLISA SDE光模块同时测量。

材料与方法

• 链霉亲和素α供体珠
• alphalisa.^®受体的珠子
• AlphaPLEX^TM值545年受体珠子
• 纯化的蛋白(目标1和2)，抗体
• 帕卡德F, 384黑的
• Pherastar.FSX

为两个蛋白靶标分别选择抗体对。对于每个蛋白质目标，一对抗体中的一个结合到AlphaPLEX^TM值545nm受体珠（蛋白质靶1）或alphalisa^®受体珠子。每对抗体的另一个抗体是生物素化的。

为了测试目的，从256 μg/mL的起始浓度制备了两倍的连续稀释蛋白target 1。将不同浓度的缓冲液或128 μg/mL的目标蛋白2混合制成平板。制备了一系列类似的稀释的目标蛋白2，用缓冲液或128 μg/mL的目标蛋白1镀。

制备含有对靶蛋白的受体珠粒和生物素化抗体的混合物并加入到反应板中。在约1小时的孵育期后，将供体珠的溶液加入到反应板中。在供体珠后，在仔细阅读之前，在室温下将反应板在室温下孵育约1小时FSX使用标准AlphaLISA模块(Em: 615 nm)或AlphaLISA SDE模块(EmA: 615 nm, EmB: 545 nm)。

PHERAstar FSX仪器设置

焦高度:	8.0毫米
光圈勺：	384年好
解决时间:	0.1秒
激发时间：	0.26秒
集成开始：	0.28秒
积分时间:	0.12秒

结果与讨论

我们首先觉得，验证具有良好特征的阿尔法丽莎是很重要的^®当alphalisa时，结果不会受到损害^®使用SDE模块。图2和表1比较了两个模块在单独平板上检测蛋白target 2的性能。

表1:使用AlphaLISA标准光学模块或AlphaLISA SDE光学模块获得的分析参数

	alphalisa.®	alphalisa.®钻
信号/空白*	138.1	124.8
z-prime * *	0.797	0.863

* 256µg/ml蛋白信号除以无蛋白对照
**基于256μg/ ml的蛋白质的数据作为阳性对照，没有蛋白质控制作为阴性对照

可以看出，SDE模块表现出与传统AlphaLISA相当的性能^®模块。

接下来我们希望调查如果在井中存在第二信号，则可能会发生可能发生的检测。为了在靶蛋白2的存在下接种靶蛋白1的最终稀释液。随后用甲基SDE模块读出平板。如图3所示，在615通道中，尽管高水平的信号在615声道中，545中的信号检测是不妥协的。

类似地，我们希望评估任何可能的效果，即545nm信号可能对615nm信道中的检测有所存在。图4中的结果表明，存在545nm信号的存在不会影响615nm信号的检测。