237

龙沙的动态内毒素检测试剂盒使用BMG LABTECH的微孔板阅读器和火星数据分析德赢vwin官网客服

Chris Quinlan Carl Peters 德赢vwin官网客服 07/2012
  • 为了避免不需要的炎症反应,重要的是DNA样品是无毒素的
  • 在基于滤光片的微孔板读卡器上进行LONZA内毒素定量试剂盒
  • 使用火星数据分析简化了数据解释

表的内容

介绍

内毒素或脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌制剂的不希望的副产物,其通常在质粒DNA和卵磷酸铵制剂中发现。LPS位于细菌的外膜中。甚至痕量均导致显着的炎症反应。血液中内毒素的存在称为内毒血症,可以导致哺乳动物的败血症。因此,必须从DNA和蛋白质制剂中检测和消除内毒素,以避免体内和体外测定中的不需要的反应。

LONZA开发了一种动力学内毒素定量试剂盒,其利用马蹄蟹血液在甚至低水平的内毒素存在下进行凝血性质。已分离凝结蛋白质,是氧琥珀细胞裂解物(LAL)的活性成分。在内毒素存在下,激活LAL中的酶酶,其又切割无色肽,导致可以通过连续检测的对硝基苯胺(PNA)的释放的释放405 nm处的吸光度测量。

测定原理

内毒素的浓度是通过比较样品与含有已知内毒素量的溶液的反应时间来计算的。


反应时间通常定义为在405 nm处产生0.2 OD的吸光度变化所需要的时间。内毒素浓度与反应时间成反比,反应时间越短,内毒素浓度越高。微孔板阅读器提供了一种简单的方法来测量动力学内毒素测定,并结合火星数据分析软件可以产生反应时间。玛氏也可以绘制标准图,并从线性回归或多项式拟合中插入未知样本。


材料与方法

  • 康宁96微孔孔,清晰
  • 基于滤波器的或光谱仪配备BMG Labtech的微孔板读卡器德赢vwin官网客服
  • LONZA动力学 - QCL内毒素套件

100 μl的标准品和未知物在405 nm处重复吸收,平板模式吸收共100 min(慢动力学)。每2.5分钟测量一次读数,总共为40分。标准包括0.005、0.05、0.5和5.0 EU/ml,其中EU =内毒素单位,内毒素活性的比较测量。由于将采用基线校正,因此不需要空白来获得最佳的检测性能。

仪器设置

检测模式: 吸光度,板模式动力学
光学: 405 nm.
循环数量: 40
周期: 150秒

结果与讨论

随时间的吸光度测量导致不同的信号曲线(图2)。

利用BMG实验室的火星数据分析软件对动力学数据进行评估。德赢vwin官网客服对原始数据进行基线校正,减去周期1。反应时间是通过对基线修正的原始数据执行“时间到阈值计算”来计算的。阈值设置为0.2 OD,产生的反应时间为秒。用线性回归模型绘制平均反应时间与EU/ml浓度的关系图(图3)。

得到的标准曲线fi的R2值为0.999,允许对未知样本进行可靠的插值(表1)。

样本 [内毒素],EU/ml由线性回归拟合计算
不知道1 4.59
未知的2 0.38

另外,MARS数据分析软件利用多项式曲线拟合,促进了标准的绘制。建议多项式阶比所使用的标准个数少一个。在这种情况下,可以使用三阶多项式拟合。

MARS数据分析软件进一步允许创建这些和其他复杂计算的模板(图4),以便在分析完成后立即提供数据减少和曲线。

结论

敏感的微孔板读卡器和强大的火星数据分析包装的组合允许易于处理来自LONZA的动力学 - QCL内毒素套件等复杂测定。MARS数据分析包与所有BMG Labtech读卡器都是标准的,可以在同一实验室的其他计算机上安装额外费德赢vwin官网客服用。该测定套件还可以通过所有BMG Labtech酶标器测量,可以测量包括Spectras德赢vwin官网客服tar的吸光度纳米, PHERAstar®FS., FLUOstar®ω,POLARstar®ω,CLARIOstar®

去前