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Lonza在BMG Labtech读者上的MyCoaler德赢vwin官网客服t测定

安妮·考克斯安东尼·皮特 Cambrex生物科学(龙沙) 10/2004
  • 可以在20分钟内检测到支原体
  • 快速,简单,高度敏感的生物发光测定
  • 检测到10 cfu / ml

表的内容

介绍

支原体是细胞培养物的严重污染物,它们是对青霉素等抗生素的抗性,并且可以改变各种细胞功能,同时它们的小尺寸意味着即使非常高的污染含量也可以完全没有注意到。支原体污染以前的细胞培养很难检测容易和快速需要长时间的培养程序或主观染色方法。龙沙开发了MycoAlertTM这是一种快速、简单和高灵敏度的基于生物发光的检测方法,可在短短20分钟内检测支原体。


通过利用支原体代谢特有的酶,真菌警报TM底物催化ADP形成ATP,然后可以用高灵敏度的生物荧光素/荧光素酶反应检测mycoalert.TM反应方程式如下所示。

通过测量背景ATP的ATP的增加,可以计算比率,当上述1表示样品中的支原体(通常细胞培养上清液)时。


MycoAlert™支原体生化活性检测试剂盒M. arginini, M. salivarium, M. fermentans, M. hyorhinis, M. orale和A. laidlawii)发现常规污染细胞培养物。MyCoalert™允许检测到极低的ATP生产水平,因此感染水平极低。测定通常可以检测每mL或更少的50cuu,尽管具体测试M. hyorhinis, M. orale和A. laidlawii具有独立枚举的样品显示检测到每mL的10CFU。


霉菌警报用的任何光度计TM当支原体很少或不存在时,检测必须足够灵敏,以应付低水平的ATP检测。配备发光德赢vwin官网客服的BMG LABTECH微孔板阅读器可以做到这一点,特别是当小心地使用正确的设置时。


本应用笔记的目的是展示如何使用MycoAlert实现这一点TM由龙沙提供的检测控制装置。

材料与方法

所有的材料都是通过正常的分销渠道从制造商获得的。

  • mycoalert.TM支原体检测套件,LONZA
  • mycoalert.TM测定对照品,龙沙
  • 德赢vwin官网客服BMG LABTECH微孔板阅读器
  • 微孔板,白色96孔,Porvair科学

所有试剂都已准备好,并按照霉菌警报的规定进行检测TM设备插入。在这种情况下,使用的是人工添加试剂而不是自动注射器。


mycoalert.TM检测对照(纯化酶作为阳性对照)用MycoAlert连续稀释1 / 2TM分析缓冲液(样品保存在冰中直到使用)。的MycoAlertTM添加检测试剂以检测样品中的背景ATP,并在环境温度(读数a)孵育5分钟后用BMG LABTECH平板阅读器进行测量,如图1所示。德赢vwin官网客服一旦读到循环暂停和霉菌警报TM添加化验底物,循环继续,在室温下孵育10分钟,然后读出发光(读数B)。

仪器设置

读取模式:
获得: 3300-3500取决于读者
光学: 顶级光学
周期数: 2带暂停和10分钟延迟
积分时间: 1秒
职位delady: 默认的0.1秒

结果与讨论

MycoAlert ratio以最终读数B/背景读数A计算,阳性值为大于1。

m . orale已知CFU的稀释倍数如图3所示。

这些结果仅从一个代表仪器中获取,并且应作为单一测量数据,使用户能够与MyCoalert结合BMG Labtech读者的敏感性能德赢vwin官网客服TM套件,但不是绝对标准。


MycoAlert是龙沙的注册商标。

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