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发光阿贝尔抗氧化测试试剂盒与酚醛树脂的维生素c型抗氧化剂

贝恩德·希普勒(1)简·奈特(2) (1)B德赢vwin官网客服MG LABTECH(2)骑士科技有限公司 02/2005
  • ROS清除剂和其他抗氧化剂的测量
  • 所需的样品体积:5μl - 50μL
  • 定量为抗坏血酸等效抗氧化单位

介绍

活性氧物质(ROS)是氧化代谢的必需介质。尽管如此,当过量产生时,ROS可以通过过氧化脂质并破坏结构蛋白,酶和核酸来损害细胞。


在包括缺血/再灌注的细胞的各种压力期间产生过量的ROS,暴露于电离和紫外线辐射和/或炎症。反应性氧物质可能有助于炎症和组织损伤。(例如:Cell膜中多不饱和脂质的氧化)。通过自由基对碳双键的自由基攻击可以导致形成相应的脂质过氧自由基和引发的链反应,其中最终产物,脂质过氧化物,不再保持细胞壁的完整性。


该方法,脂质过氧化可以通过羟基自由基oh引发在铁,作为Fe的反应中2 +, 参与。在生物系统中,很多关注都集中在两个自由基,超氧化物阴离子和羟基。

可以使用发光监测ROS的生成过程。由于ROS的天然弱发光非常弱,过去已经使用了鲁米酚和露韧带,以提供可测量的信号。然而,与胆素相比,这两种物质的发光非常小®这种技术可以对非常小的样本进行精确分析。


盗贼®是海洋岩体生物发光软体动物,Pholas dactylus和普通的Piddock的光蛋白质。盗贼®它本身不会发光,但可以被自由基和其他活性氧激活。样品清除自由基和其他氧化剂的能力可以通过所述的含有酚醛酶的检测试剂盒进行监测®


材料与方法

所有的材料都是通过正常的分销渠道从制造商获得的。

  • 德赢vwin官网客服BMG Labtech介质读者具有发光检测和注射器
  • 96孔板,白色
  • 抗氧化能力未知的样品
  • 测试套件KSL-ABEL-21 M2,Knight Scientific Limited网站:www.knightscientific.com

此外,还根据需要使用各种制造商提供的消耗品,如移液管尖端和管。


超氧化物抗氧化试验的方案

当将溶液B加入溶液A时瞬间产生超氧化物。通过将试剂注射液B注入含有溶液A的微孔板中,与致苯脲一起注入®,具有和不具有10μL未知抗氧化能力的流体样品。


进入微孔板良好补充说明:

  • 25μL测定缓冲液(用于对照)或15μL测定缓冲液+10μl样品
  • 50μL抗氧化剂致胆碱®
  • 100μl溶液a

当将25μl溶液B注入微孔板孔时,开始测定,这必须处于光测量位置。


使用以下参数进行测定:增益= 3300-3500,具体取决于读取器,井模式,间隔数= 32,MEA。间隔时间= 1 s,总测量。时间= 32 s,开始注射= 0 s

抗坏血酸的标准曲线

移液管阱:

  • 50μL胆素
  • 5 μL重组和分析缓冲液(R&A)
  • 100μl溶液a

使用BMG Labtech微孔板读卡器的2内置试剂喷射器可以自动产生稀释系列的抗坏血酸盐。德赢vwin官网客服喷射器1与1mmol / L抗坏血液溶液和喷射器2的体积进行编程,其中R和A缓冲器的体积如表1所示。

表1:抗坏血酸盐和R&A缓冲液加入微孔板以记录标准曲线。

1 mmol / l抗坏血酸(μl) R&A缓冲器(μl) 抗坏血酸(µmol/L) 200µL
0. 20. 0.
2 18 10
4. 16 20.
8. 12 40
12 8. 60
16 4. 80
20. 0. One hundred.

相应的抗坏血酸标准曲线如下所示(图1)。

成绩与讨论

将载有测定成分和不同样品的96孔白色板放入BMG LABTECH微孔板读取器中,将溶液b注入进试剂注射器。测定过程如上所述。德赢vwin官网客服如果Pholasin®当超氧化物产生时,光就会发出。


如果样品中有能够清除超氧化物的样品中存在抗氧化剂,那么这些抗氧化剂将与致力竞争®对于超氧化物和更少的光线将被检测到。含有没有样品的对照随着每个测定运行。


用亚伯的发光测量®使用具有未知抗氧化容量的不同物质的抗氧化试验如图2所示。

这些物质是从天然植物提取物中提取的。与对照(100%)相比,可检测到超氧化物的清除。


抑制分别为32%,80%和97%。通过抗坏血酸标准曲线可以量化未知物质的抗氧化能力(图3)。

80%的抑制量约为77 μmol/L。x值(77 μmol/L)乘以稀释倍数(20)得到样品中抗坏血酸等效抗氧化剂单位(10 μL),为1.5 mmol/L。


结论

abel.®抗氧化试剂盒用胆素®可以成功用于测量具有未知抗氧化能力的物质。


使用带有发光检德赢vwin官网客服测和喷射器的BMG LABTECH微孔板阅读器,测试可以非常快速地完成,具有很高的精度和重现性。

Abel是骑士科学有限公司的注册商标

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