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用NEPHELOstar Plus酶标仪测定类风湿因子

丽莎·麦克·安妮·巴顿 曼彻斯特大学 08/2005
  • NEPHELOstar®为类风湿因子的检测和量化提供更高的通量和成本效益
  • 结果与大尺度图像一致®免疫化学系统

表的内容

介绍

类风湿因子(RF)是一种免疫球蛋白,对人或动物免疫球蛋白G (IgG) Fc区的抗原位点产生反应。主要亚型为IgM,也有其他亚型(IgA、IgD和IgG)。RF在类风湿性关节炎(RA)患者中比在一般人群中更常见,但也可在其他结缔组织疾病、感染后患者和一些其他疾病(如结节病和肝病)中发现。然而,RF的存在是类风湿关节炎的分类标准之一,RF的存在与较差的预后相关,如发展为糜烂性疾病的风险增加。


可以用多种方法测量射频。其中包括颗粒凝集试验,它依赖RF IgM类的凝集特性。IgG(通常是人或兔)与乳胶等载体结合,通过絮凝检测RF的存在。加倍稀释血清直到絮凝物不再可见时,就可以半定量测量抗体滴度。然而,该测定法需要大量血清,耗时且依赖于观察者。

另一种测量RF的方法是使用比浊法。将患者血清加入含有一定量抗原(IgG)的微孔板中。任何RF存在都会与IgG形成抗体-抗原复合物,通过光散射可以确定RF抗体的浓度。该系统提供的潜在优势是更好的通量,对单个样本稀释的客观读数,使用更小的血清体积和成本效益。


在临床诊断设置中,测量通常使用图像进行®免疫化学系统但是这种平台的购买和维护都很昂贵。本应用笔记研究了一种使用BMG实验室霞石星测试RF的方法德赢vwin官网客服微孔板读者。


材料与方法

原理
类风湿性因子水平的肾小序测试基于抗原 - 抗体反应。RF与IgG结合形成免疫复合物。随着免疫复合物的数量增长,溶液变得更明显“阴天”。nephelostar.微孔板读卡器通过光束通过孔来测量样品的浑浊度。RF的存在越多,形成的免疫复合物越多,产生的光散射也越多。散射光的数量与免疫复合物的数量成正比,因此悬浮在样品中的射频粒子。

材料

  • NEPHELOstar读卡器和软件(BMG LABTECH)德赢vwin官网客服
  • RF-PAIA试剂盒,包括一套5校准剂,试剂和缓冲液(Orion diagnostics, Finland)
  • 96孔透明孔板(Bibby-Sterilin Ltd, UK)

操作程序
1.平板取10 μL未稀释校准器1 ~ 5,已知RF阳性和阴性血清及待测血清样本。
2.加280 μL射频缓冲液。
3.轻轻上下移液,使溶液混合,同时尽量避免冒泡。
4.将底片插入霞石星如图所示,微孔板读卡器并调整板模式动力学的设置:

获得: 85
Pos.延迟: 0.1秒
不。周期: 2
量。开始时间: 0
量。时间/嗯: 1
激光强度: 50%
光束焦点: 2毫米
震动时间: 20年代
摇晃宽度: 4毫米
摇晃: 在每个周期之前

5.开始测试。循环1将摇板和采取背景阅读。
6.根据提示,取出酶标板,每孔加试剂10 μL,上下移液辅助混合*。
7.再次插入板,然后按继续。循环2将再次摇动板,并采取最终阅读。

*使用移液管混合应小心进行。混合过程中的泡沫产生会干扰测定,可能导致结果不准确。


结果与讨论

可以大约测量具有五个校准剂和正和阴性对照的80个样品。2分钟。包括移液 - 所有解决方案(用于缓冲液的多通道,所有其他单独移液器),运行大约需要2小时。


NEPHELOstar检测血清样本的结果与来自Beckman Coulter Imprage的人进行比较微孔板读者®免疫化学系统使用相同的血清样本(图1)。回归分析显示读数之间的相关性为94.1%。

结论

通过这种独立的分析,我们已经证明了霞石星平板阅读器可准确测定RF抗体状态和滴度,对类风湿关节炎的诊断和幼年特发性关节炎的亚群定义至关重要。因此,这种射频检测方法是一种可行且廉价的检测方法,可用于中到高通量实验室。

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