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Nephelostar Plus Microplate Reader的类风湿因子测量

丽莎·麦克·安妮·巴顿 曼彻斯特大学 08/2005
  • nephelostar.®+为类风湿因子的检测和定量提供更高的吞吐量和成本效益
  • 结果是具有大规模爆炸的一致性®免疫化学系统

介绍

类风湿因子(RF)是免疫球蛋白,其对人或动物免疫球蛋白G(IgG)的Fc区上的抗原位点反应。主要同种型是IgM,尽管其他人发生(IgA,IgD和IgG)。RF在类风湿性关节炎(RA)患者中更常见于普通人物,但可以在其他结缔组织疾病的患者中发现,在感染之后和许多其他疾病如结节病和肝病。然而,RF的存在是RA的分类标准之一,并且RF的存在与较差的预后相关,例如增加侵蚀性疾病的风险增加。


RF可以通过许多方法测量。这些包括颗粒凝集试验,其依赖于IgM类RF的凝集性质。IgG通常是人或兔,与胶乳如载体结合,并且通过絮凝检测RF的存在。血清的稀释稀释液直至絮凝不能可视化,允许半定量测量抗体滴度。然而,测定需要大量的血清,是耗时和观察者的依赖。

测量RF的替代方法使用Nephelometry。将患者血清加入含有固定量的抗原(IgG)的微孔板中。目前的任何RF将形成抗体 - 抗原复合物与IgG,RF抗体的浓度可以通过光分散来确定。该系统提供的潜在优势是更好的产量,客观读取单一样品稀释,使用较小的血清体积和成本效益。


在临床诊断设置中,通常使用浸泡进行测量®免疫化学系统,但这些平台购买和维护昂贵。本应用笔记使用BMG Labtech Nephelostar调查用于测试RF的方法德赢vwin官网客服+标仪。


材料与方法

原则
类风湿因子水平的浊度检测是基于抗原抗体反应。RF与IgG结合形成免疫复合物。随着免疫复合物数量的增加,溶液明显变得“混浊”。的NEPHELOstar+微孔板读卡器通过光束井,以测量样品的浊度。存在的RF越多,形成更多的免疫复合物并且将发生更轻微的散射。散射的光量与免疫复合物的数量成正比,因此悬浮在样品中的RF颗粒。

材料

  • nephelostar.+板读者和软件(BMG Labtech)德赢vwin官网客服
  • rf-paia套件,包括套5个校准剂,试剂和缓冲液(Orion Diagnostica,芬兰)
  • 96孔清晰的微孔板(英国Bibby-Sterilin Ltd)

操作方法
1.将10μl未稀释的校准剂1至5,已知的RF阳性和阴性血清和待测血清样品。
2.加入280μL的RF缓冲液。
3.轻轻地向上移动以混合溶液,同时试图避免冒泡*。
4.将板插入Nephelostar+微孔板读取器和调整板模动态设置如下图所示:

获得: 85.
pos。延迟: 0.1秒
循环数量: 2
量。开始时间: 0秒
量。时间/: 1秒钟
激光强度: 50%
梁专注: 2毫米
摇晃时间: 20 S.
颤抖的宽度: 4毫米
震动: 在每个周期

5.开始测试。循环1将摇动板并拍摄背景读数。
6.当促进时,取出微孔板,并加入10μl试剂到每个孔,向上和向下移液以辅助混合*。
7.再次插入板,按继续。循环2将再次摇动板,并取得最终读数。

*使用移液管混合时应小心。在混合过程中气泡的产生将干扰分析,并可能导致不准确的结果。


成绩与讨论

80个样品有5个准定剂和一个阳性和阴性对照,可以在大约。2分钟。包括所有溶液的移液(多通道缓冲液,所有其他单移液),运行大约需要2小时。


由Nephelostar测试的血清样品获得的结果+酶标仪与贝克曼-库尔特成像仪进行比较®免疫化学系统使用相同的血清样品(图1)。回归分析表明,读数之间的相关性为94.1%。

结论

通过这种独立的分析,我们已经表明Nephelostar+板式读卡器可用于准确确定RF抗体状态和滴度,这对于诊断类风湿性关节炎和少年特发性关节炎的亚组定义至关重要。因此,该RF测定是一种可行且廉价的测定测定,可用于培养基到高通量实验室。

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