- 通用账面®测定常见生物酶促反应的副产物
- 对于表观遗传研究，可以监测AMP / GMP用于甲基转移酶或乙酰转移酶活性
- ADP监测激酶，ATP酶或螺旋酶;G-proteins的GDP;和糖基转移酶的UDP
介绍
纸张®来自Bellbrook Labs提供通用，用于核苷酸检测的通用的通用HTS测定，如ADP，UDP，GDP和AMP。这些测定有三种检测模式 - 荧光极化（FP）。荧光强度（FI）和时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）。
Pherastar系列的微孔板读者对于所有三种检测格式都很完美。对于FP和TR-FRET，它使用独特的同步双发射检测系统，该检测系统可以在微孔板的一个读取中测量发射波长。同时双发射检测不仅将板读取时间减少了一半，因此由于良好体积，浓度或激发能量波动的差异而校正任何信号变化。
在这个安慰中，我们展示了Pherastar的表现FS.用于检测纸张中的不同核苷酸®FP测定。仪器可以实现Z'> 0.8，ΔMP大于100的ΔMP，以10％转换为所有缺点®用10μm相应的标准曲线测试的测定。
测定原则
材料与方法
- 过筛选XMP检测试剂
- 黑色384孔板来自康宁
- Pherastar.®FS.微孔板读卡器（BMG Labtech）德赢vwin官网客服
所有XDP缺陷器的代表分析ADP2将更详细地解释测定。随着ADP的比率：ATP增加，所附示踪剂与游离示踪剂的比例降低，导致MP值的总体减少。如下所述制备15分标曲线：
1.在黑色384孔板的整个行中分配10μl的每个ATP / ADP组合。
2.将10μLADP检测混合添加到这些行中。
3.将10μl的10μl10μl10μlATP/0μmADP组合成第P.
4.将10μl的自由示踪剂分配到孔P1至P12中。
5.将10μl缓冲液分配到P13-P24孔中。
对于FP测量，应安装播放器特定的FP MODUL。激发波长为590nm，发射波长均为675nm。应使用福利将目标MP值设置为20MP的焦点和增益调整，同时使用仅包含自由示踪剂的井。
成绩与讨论
表1：表显示了10μmatp / adp的z'值;10μmatp/ amp;10μmudp葡糖醛酸/ UDP和10μmGTP/ GDP在Pherastar中产生FS。突出显示的值显示了10％转换的Z'，演示了BMG Labtech的Pherastar FS中的卓越的测定性能。德赢vwin官网客服
| ％dirm. | ADP.2测定 | amp.2测定 | UDP.2测定 | GDP assay. |
| 20. | 0.88 | 0.92 | 0.86 | 0.86 |
| 10. | 0.85 | 0.93 | 0.91 | 0.86 |
| 5. | 0.82 | 0.93 | 0.85 | 0.81 |
| 4. | 0.77 | |||
| 3. | 0.74 | 0.86 | 0.83 | |
| 2 | 0.58 | 0.55 | 0.57 | 0.67 |
表2：荧光偏振模式（10次闪光，不同的微孔板格式）的读数读数仔细读者系列的读取时间。
| 荧光极化读取时间（10闪光灯） | ||
| Pherastar.FS. | 读者没有同时双发射检测 | |
| 384井 | 0:38 | ≥1:16（0:38 x 2） |
| 1536井 | 1:52 | ≥3:44（1:52 x 2） |
| 3456井 | 9:47 | ≥18:34（9:47 x 2） |
结论
Bellbrook Labs提供四个用于直接检测ADP，AMP / GMP，UDP和GDP的播报机测定。出于使用BMG Labtech`s Pherastar的所有四种测定，显示出优异的Z'值和大信号。德赢vwin官网客服FS.。
此应用笔记演示了BMG Labtech Pherastar的验证德赢vwin官网客服FS.用于杂交FP测定的仪器。通过利用在本申请中建议的优化仪器设置，可以实现10％转换的Z'值> 0.7和ΔMP值> 120。
