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甲基转移酶,乙酰转移酶,激酶和GTPases都可以用Transcreener测定

Meera Kumar (1) Tom Zielinski (1) Andrew Koop (1) Franka Ganske (2) EJ Dell (2) (1)贝尔布鲁克实验室(2)BMG实验室德赢vwin官网客服 05/2012
  • 通用transcreener®测定普通生物酶反应的副产品
  • 在表观遗传学研究中,AMP/GMP可以监测甲基转移酶或乙酰转移酶的活性
  • 监测激酶、atp酶或解旋酶的ADP;国内生产总值(GDP) g;UDP用于糖基转移酶

表的内容

介绍

Transcreener®来自Bellbrook Labs提供通用,用于核苷酸检测的通用的通用HTS测定,如ADP,UDP,GDP和AMP。这些测定有三种检测模式 - 荧光极化(FP)。荧光强度(FI)和时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)。


pherstar系列的微孔板阅读器是所有三种检测格式的完美。对于FP和tri - fret,它使用了一种独特的同时双发射检测系统,在微孔板的一个读数中测量两个发射波长。同时进行双发射检测不仅可以将平板读取时间减少一半,还可以校正由于井眼体积、浓度或激发能量波动而产生的任何信号变化。


在这个应用笔记中,我们展示了pherstar的性能FS.用于检测跨滤器中不同的核苷酸®外交政策分析。该仪器在10%转换时可实现Z’>0.8和δ mP大于100®用10μm相应的标准曲线测试的测定。


测定原理

材料与方法

  • Transcreener XMP检测试剂
  • 黑色的384孔板来自康宁
  • PHERAstar®FS.microplate阅读器(BMG L德赢vwin官网客服ABTECH)

代表所有XDP Transcreener分析ADP2将更详细地解释测定。随着ADP的比率:ATP增加,所附示踪剂与游离示踪剂的比例降低,导致MP值的总体减少。如下所述制备15分标曲线:

1.每一种ATP/ADP组合在384孔黑色板上取10 μL。
2.在这些行中加入10 μL的ADP检测混合液。
3.在P行中加入10 μL ATP/0 μM ADP组合。
4.在P1 ~ P12孔中加入10 μL游离示踪剂。
5.在P13-P24孔中取10 μL缓冲空白。

在FP测量时,应安装跨滤网专用FP模块。激发波长为590 nm,发射波长均为675 nm。当使用只含有游离示踪剂的井将目标mP值设置为20 mP时,应进行焦点和增益调整。


结果与讨论

表1:表显示了10μmatp / adp的z'值;10μmatp/ amp;10μmudp葡糖醛酸/ UDP和10μmGTP/ GDP在Pherastar中产生FS。突出显示的值显示Z '在10%转换,证明了优越的分析性能在BMG LABTECH的PHERAstar FS。德赢vwin官网客服

% Conv ADP.2分析 AMP2分析 UDP2分析 国内生产总值分析
20. 0.88 0.92 0.86 0.86
10 0.85 0.93 0.91 0.86
5. 0.82 0.93 0.85 0.81
4. 0.77
3. 0.74 0.86 0.83
2 0.58 0.55 0.57 0.67

表2:在荧光偏振模式下(10次闪烁,不同的微孔板格式)pherstar系列微孔板阅读器的读取时间。

荧光偏振读取次数(10次闪烁)
PHERAstarFS. 读取器没有同时双发射检测
384年好 0:38 ≥1:16 (0:38 x 2)
1536井 1:52 ≥3:44(1:52 x 2)
3456年好 愚人节 ≥19:34 (9:47 x 2)

结论

Bellbrook Labs提供四个用于直接检测ADP,AMP / GMP,UDP和GDP的播报机测定。出于使用BMG Labtech`s Pherastar的所有四种测定,显示出优异的Z'值和大信号。德赢vwin官网客服FS.

本应用程序说明演示了BMG LABTECH pherstar的验证德赢vwin官网客服FS.用于Transcreener FP分析的仪器。利用本应用笔记中建议的最佳仪器设置,可实现Z’值> 0.7和δ mp值> 120在10%转换。

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