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甲基转移酶,乙酰转移酶,激酶和GTP酶都可以用透气测定法测量

Meera Kumar(1)Tom Zielinski(1)Andrew Koop(1)弗兰卡甘克(2)ej戴尔(2) (1)Bellbrook Labs(2)BMG德赢vwin官网客服 Labtech 05/2012
  • 通用账面®测定常见生物酶促反应的副产物
  • 对于表观遗传研究,可以监测AMP / GMP用于甲基转移酶或乙酰转移酶活性
  • ADP监测激酶,ATP酶或螺旋酶;G-proteins的GDP;和糖基转移酶的UDP

介绍

纸张®来自Bellbrook Labs提供通用,用于核苷酸检测的通用的通用HTS测定,如ADP,UDP,GDP和AMP。这些测定有三种检测模式 - 荧光极化(FP)。荧光强度(FI)和时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)。


Pherastar系列的微孔板读者对于所有三种检测格式都很完美。对于FP和TR-FRET,它使用独特的同步双发射检测系统,该检测系统可以在微孔板的一个读取中测量发射波长。同时双发射检测不仅将板读取时间减少了一半,因此由于良好体积,浓度或激发能量波动的差异而校正任何信号变化。


在这个安慰中,我们展示了Pherastar的表现FS.用于检测纸张中的不同核苷酸®FP测定。仪器可以实现Z'> 0.8,ΔMP大于100的ΔMP,以10%转换为所有缺点®用10μm相应的标准曲线测试的测定。


测定原则

材料与方法

  • 过筛选XMP检测试剂
  • 黑色384孔板来自康宁
  • Pherastar.®FS.微孔板读卡器(BMG Labtech)德赢vwin官网客服

所有XDP缺陷器的代表分析ADP2将更详细地解释测定。随着ADP的比率:ATP增加,所附示踪剂与游离示踪剂的比例降低,导致MP值的总体减少。如下所述制备15分标曲线:

1.在黑色384孔板的整个行中分配10μl的每个ATP / ADP组合。
2.将10μLADP检测混合添加到这些行中。
3.将10μl的10μl10μl10μlATP/0μmADP组合成第P.
4.将10μl的自由示踪剂分配到孔P1至P12中。
5.将10μl缓冲液分配到P13-P24孔中。

对于FP测量,应安装播放器特定的FP MODUL。激发波长为590nm,发射波长均为675nm。应使用福利将目标MP值设置为20MP的焦点和增益调整,同时使用仅包含自由示踪剂的井。


成绩与讨论

表1:表显示了10μmatp / adp的z'值;10μmatp/ amp;10μmudp葡糖醛酸/ UDP和10μmGTP/ GDP在Pherastar中产生FS。突出显示的值显示了10%转换的Z',演示了BMG Labtech的Pherastar FS中的卓越的测定性能。德赢vwin官网客服

%dirm. ADP.2测定 amp.2测定 UDP.2测定 GDP assay.
20. 0.88 0.92 0.86 0.86
10. 0.85 0.93 0.91 0.86
5. 0.82 0.93 0.85 0.81
4. 0.77
3. 0.74 0.86 0.83
2 0.58 0.55 0.57 0.67

表2:荧光偏振模式(10次闪光,不同的微孔板格式)的读数读数仔细读者系列的读取时间。

荧光极化读取时间(10闪光灯)
Pherastar.FS. 读者没有同时双发射检测
384井 0:38 ≥1:16(0:38 x 2)
1536井 1:52 ≥3:44(1:52 x 2)
3456井 9:47 ≥18:34(9:47 x 2)

结论

Bellbrook Labs提供四个用于直接检测ADP,AMP / GMP,UDP和GDP的播报机测定。出于使用BMG Labtech`s Pherastar的所有四种测定,显示出优异的Z'值和大信号。德赢vwin官网客服FS.

此应用笔记演示了BMG Labtech Pherastar的验证德赢vwin官网客服FS.用于杂交FP测定的仪器。通过利用在本申请中建议的优化仪器设置,可以实现10%转换的Z'值> 0.7和ΔMP值> 120。

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