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分子探针NanoOrange检测在BMG LABTECH酶标仪上进行德赢vwin官网客服

特蕾西Madgett 英格兰西部健康与生命科学学院 01/2008
  • NanoOrange®在BMG LABTECH酶标仪上进行蛋白质定量分析德赢vwin官网客服
  • 高和小的浓度范围评估
  • 套件可以很容易地适应高吞吐量测量

表的内容

介绍

近年来,近年来近年来近年来的蛋白质组学学士学队逐渐扩大。诸如二维差凝胶电泳(2D Dige)的技术需要准确定量蛋白质,最多可以在单个凝胶上装载三个标记的样品以进行比较。


用于确定蛋白质定量的测定方法包括280nm的吸光度,Bradford测定,低温测定,BCA方法和更敏感的测定,例如氟opro-le®(Sigma-Aldrich)和纳摩金®(分子探针®)。


在280nm(a280)下的溶液吸光度的测量存在样品之间的变异性和来自核酸和其他污染物的干扰的问题。洗涤剂和还原剂会导致上述其他测定的问题 - 这些试剂存在于2D凝胶电泳的样品中。


荧光方法对定量蛋白质更敏感而不是吸光度方法。纳摩金®分子探针的蛋白质定量测定®是一种高度敏感的检测方法,有效范围为100 ng/mL和10 μg/mL的荧光标记板阅读器。纳米橙的光谱®试剂在图1中给出。

材料与方法

制造商提供以下材料如详细说明:

  • NanoOrange®蛋白质定量套件
  • MJ Research PTC200 Peltier热循环仪
  • 德赢vwin官网客服BMG Labtech介质读卡器
  • 微孔板,黑色96井(Greiner Bio-One)
  • 一般实验室耗材包括吸管尖端和微量离心管

试剂:

  • NanoOrange®蛋白定量试剂A
  • NanoOrange®蛋白定量稀释液
  • 牛血清白蛋白(BSA)标准(2 mg / ml)

纳摩金的工作®将稀释剂A稀释500倍于稀释剂b的1:10稀释成试剂,在工作纳米橙中1:200稀释成10 μg/mL的BSA原液®试剂对砧木BSA溶液进行了一系列稀释,进一步的浓度从0.2 μg/mL到10 μg/mL。空白溶液中有纳米橙®单独试剂。样品稀释液在工作中制成纳摩金®试剂(例如,1:100,1:500,1:1000)。在将标准和样品的变性下降之后,将100μl置于微孔板中以进行测量。将制备的96孔板插入仪器中并用以下参数读取流动模式:

励磁过滤器: 485-12
排放过滤器: 570-10.
获得: 选择的板材,选择最高强度
周期数: 1
每口井闪光次数: 10

使用BMG LabTech MARS数据分析软件进行评估数据。德赢vwin官网客服从测量中减去空白测量的平均值,并绘制标准曲线。

结果与讨论

在数据上执行四个参数FIT,其产生非常高的R值为0.9998。(图2)。

还在最高蛋白质浓度上单独测量小浓度范围(图3)。

获得蛋白质浓度和流浊单位之间的线性关系,表明可以使用BMG Labtech微孔板读卡器测定样品中的小浓度的蛋白质。德赢vwin官网客服

结论

纳摩金®蛋白质定量试剂盒可以很容易地适用于FL荧光微孔板读取器,例如BMG LabTech,并以高吞吐量方式使用。德赢vwin官网客服


该仪器允许在用户定义的温度下测量终点或慢和高动力学,可以方便地配备喷油器。

纳米橙是ThermoFisher科学公司的注册商标

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