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使用BMG Labtech的Nephelostar Plus的尼触线监测Candida albicans的生长德赢vwin官网客服

U-C。HIPLER. 席勒耶拿大学 08/2008
  • 用于真菌生长测定和药物溶解度测量的激光幼儿测量
  • 监测白色念珠菌存在抗真菌剂
  • 给出了潜在药物的相溶解度图

表的内容

介绍

环糊精(CD)由于能够与适当大小的药物分子形成包合物而成为有用的药物赋形剂。与游离药物相比,合成的配合物通常具有多种物理化学优势,包括增加水溶性、提高生物利用度、改善稳定性、减少副作用等。


Econazole-硝酸盐(EC)和Ciclopirox-奥拉莫(CI)是众所周知的抗真菌剂,适用于治疗许多诱导型感染。以前的研究表明,通过与天然环糊精的络合,可以通过与天然环糊精的络合来提高溶解性能和产生非常低的水溶性(约3μg/ ml,在25℃下的约3μg/ ml,特别是β-CD3-5。


通过增加药物的水溶性,应该可以提高其生物利用度,从而能够改善口腔或局部配方。

激光比浊法已被证明是一种可靠的测量药物溶解度在平板格式高达384孔的技术。激光比浊法是对前向散射光的测量。当激光束直接穿过一个清晰的溶液时,溶液中的粒子或混浊悬浮物(本研究中的真菌)越多,前向散射光的量就越大(以单位测量)。散射光的能量与悬浮粒子的浓度成正比,最高可达三个数量级。在此,我们描述使用激光浊度法来研究络合作用对BMG实验室的NEPHELOstar药物抗真菌活性的影响德赢vwin官网客服®。此外,利用比浊法制备相溶解度图并监测真菌生长。

材料与方法

  • 白色念珠菌DSM 11225
  • 无菌和透明的96孔板,Greiner Bio-Oneβ-环糊精,Wacker-Chemie
  • 德赢vwin官网客服BMG Labtech Nephelostar.

培养的制备
白念珠菌在SGA(Sabouraud-glucose-琼脂以庆大霉素 - 氯霉素来自Bioomerieux,德国)的葡萄糖 - 葡萄糖 - 紫霉素)在30℃下在30℃下进行24-48小时。使用无菌线圈从过夜培养中选择相同形态类型的三到五种脱离的菌落,并接种在20mL(SGB)中。将悬浮液在250rpm / 30℃下振荡温育24小时。然后使用Cassy计算过夜细胞培养物®1,在SGB中调整到6×105 cells/mL的最终工作浓度(Sabouraud-Glucose- Bouillon from Oxoid Ltd, UK)。


抗真菌药物的制备
EC和CI分别溶解在氯仿/甲醇1:1的混合物中,最终得到含有20 mg/mL抗真菌剂的原液。用SGB稀释EC原液,调整为1.25 ~ 100 μg/mL;浓度范围为1.25 ~ 10 μg/mL。所有溶液保存在−80°C直到使用。

制备包含和抗真菌络合物

通过将其溶解在氯仿/甲醇混合物1:1中来制备EC的溶液。将Cd溶于85-90℃的热水中。EC和Cd溶液的等摩尔量(1:1摩尔比)在85-90℃下搅拌30分钟混合在一起。通过冷却,获得复合物的结晶。使用G3过滤器过滤该配合物并在干燥器中保持过夜。另一方面,也根据先前提到的方法制备CI和Cd之间的第二络合物,其中将甲醇用作Ci的适当溶剂。此外,还使用了Ci:Cd的1:2的摩尔比。使用DMSO作为溶剂,在12.5-100μg/ ml的浓度范围内制备CD-EC的抗真菌络合物,同时使用蒸馏水在150-400μg/ ml的浓度范围内制备CD-CI。

相溶解度的研究
在本实验中,药物和配合物均用DMSO稀释。然后将药物和络合溶液分别移入DMSO浓度为1-5 vol.%的PBS-buffer中。所有样品都在霞石星上测量在30°C,积分时间0.1 s,使一个板(96个样品)可以在~68 s内扫描。增益为122,激光强度为1%,可以直接比较所有结果。所有原始数据都使用BMG实验室火星数据分析进行处理。德赢vwin官网客服散射光将保持一个恒定的强度,直到发生降水。在这一点上,它将急剧增加。


结果与讨论

相溶解度图
采用激光比浊法监测溶解度图,确定二甲基亚砜(DMSO)溶液在96孔板中的溶解度(图1)。

在没有CD的情况下,EC的溶解度被确定为约1.3 mg/mL(图表未显示),而在有CD的情况下,CD - EC复合物的溶解度增加到3.1 mg/mL。
环哌唑胺(CI)的溶解度结果与其他抗真菌药物不同。


在没有环糊精的情况下,CI的溶解度被确定为约1.2 mg/mL(图表未显示)。CD-CI络合物得到了直线,没有发现沉淀点,表明在浓度范围内完全溶解(图2)。

复合抗真菌剂对杂交生长的影响白色念珠菌

与CD-EC相反,络合物的Ciclopirox效果较小(图3)。以200μg/ ml的复合物的浓度,抑制细胞并以300μg/ ml的浓度,杀死细胞。与已经在10μg/ mL的细胞死亡引起的游离CI相比,CD-CI复合物也较低。


结论

本研究证明了96孔微滴板激光比浊法可以作为一种快速测定潜在药物化合物溶解度的方法。


激光肾小管可以区分药物刚刚进入或刚出来解决方案的浓度。另一方面,该技术可以有效地用于监测和评估像真菌或细菌等微生物的生长。

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