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使用BMG LABTECH的NEPHELOstar Plus浊度法监测白色念珠菌的生长德赢vwin官网客服

U-C。HIPLER. 弗里德里希 - 席勒大学耶拿 08/2008
  • 用于真菌生长测定和药物溶解度测量的激光幼儿测量
  • 监测白色念珠菌存在抗真菌药物
  • 潜在药物的相溶解度图

介绍

环糊精(CD)由于其与适当大小的药物分子形成包合物的潜力,已成为有用的药物辅料。与游离药物相比,所得到的复合物通常具有多种物理化学优势,包括增加水溶性、增强生物利用度、改善稳定性、减少副作用等。


Econazole-硝酸盐(EC)和Ciclopirox-奥拉莫(CI)是众所周知的抗真菌剂,适用于治疗许多诱导型感染。以前的研究表明,通过与天然环糊精的络合,可以通过与天然环糊精的络合来提高溶解性能和产生非常低的水溶性(约3μg/ ml,在25℃下的约3μg/ ml,特别是β-CD3-5。


通过增加药物的水溶性,应该可以提高其生物利用度,从而能够改善口腔或局部配方。

激光比浊法已被证明是一种可靠的技术,测量药物在平板格式高达384孔的溶解度。激光浊度法是测量前向散射光的方法。当激光束通过一个清晰的溶液时,溶液中的粒子或混浊的悬浮物(在这项研究中是真菌)越多,前向散射光的量就越大(以单位衡量)。散射光的能量与悬浮液中的粒子浓度成正比,最高可达三个数量级。在这里,我们描述了使用激光比浊法研究络合对药物抗真菌活性的影响,使用BMG LABTECH的NEPHELOstar德赢vwin官网客服®+。此外,使用Nephelometry制备相溶解度图并监测真菌生长。

材料与方法

  • 白色念珠菌DSM 11225
  • 无菌和透明的96孔板,Greiner Bio-Oneβ-环糊精,Wacker-Chemie
  • 德赢vwin官网客服BMG LABTECH NEPHELOstar+

准备的文化
C.老年人在SGA(Sabouraud-glucose-琼脂以庆大霉素 - 氯霉素来自Bioomerieux,德国)的葡萄糖 - 葡萄糖 - 紫霉素)在30℃下在30℃下进行24-48小时。使用无菌线圈从过夜培养中选择相同形态类型的三到五种脱离的菌落,并接种在20mL(SGB)中。将悬浮液在250rpm / 30℃下振荡温育24小时。然后使用Cassy计算过夜细胞培养物®1并在SGB(来自Okoid Ltd,英国的Sabouraud-glucose-Bouillon中,调整到6×105细胞/ ml的最终工作浓度。


制备抗真菌剂
EC和CI分别溶解在氯仿/甲醇1:1的混合物中,最终获得含有20mg /mL抗真菌剂的原液。用SGB稀释EC原液,调整为1.25 ~ 100 μg/mL;在1.25 ~ 10 μg/mL范围内;所有溶液在使用前都保存在−80°C。

制备包含和抗真菌络合物

在氯仿/甲醇混合溶液中1:1溶解制备EC溶液。CD溶于85-90°C的热水中。将等摩尔量(1:1摩尔比)的EC和CD溶液混合,在85-90°C搅拌30分钟。通过冷却,配合物得到结晶。使用G3过滤器过滤,并在干燥器中保存一夜。另一方面,也按照上述方法制备了第二种CI与CD的配合物,其中甲醇为CI的合适溶剂。此外,CI:CD的摩尔比为1:2。以DMSO为溶剂,在12.5 ~ 100 μg/mL浓度范围内制备CD-EC抗真菌复合物,以蒸馏水为溶剂,在150 ~ 400 μg/mL浓度范围内制备CD-CI。

相溶解度的研究
在本实验中,药物和配合物均在DMSO中稀释。然后将药物溶液和复合物溶液分别移液管置于pbs缓冲液中,浓度为1 ~ 5 volume .%。所有样品都是在NEPHELOstar上测量的+在30℃下,积分时间为0.1 s,在~68 s内可以扫描96个样品。增益为122,激光强度为1%,以便对所有结果进行直接比较。所有原始数据均采用BMG LABTECH MARS数据分析进行处理。德赢vwin官网客服散射光将保持恒定的强度,直到降水发生。在这一点上,它将急剧增加。


成绩与讨论

相溶解度图
使用激光比浊法监测溶解度图,确定了以二甲亚砜(DMSO)溶液形式提供的潜在候选药物在96孔板中的溶解度(图1)。

在没有CD的情况下,EC的溶解度被确定为约1.3 mg/mL(图未显示),而CD - EC复合物的溶解度增加到约3.1 mg/mL。
环吡罗胺(CI)的溶解度结果与其他抗真菌药物不同。


在没有环糊精的情况下,CI的溶解度约为1.2 mg/mL(图未显示)。CD-CI络合物得到了直线,没有发现沉淀点表明在浓度范围内完全溶解(图2)。

复合抗真菌剂对杂交生长的影响白色念珠菌

与CD-EC相反,复合物环吡罗酮的效果较差(图3)。复合物的浓度为200 μg/mL时,细胞受到抑制,而复合物的浓度为300 μg/mL时,细胞被杀死。与在10 μg/mL浓度下导致细胞死亡的游离CI相比,CD-CI复合物的有效性也较低。


结论

本研究证明了96孔微量滴定板激光比浊法可以快速测定潜在药物化合物的溶解度。


激光肾小管可以区分药物刚刚进入或刚出来解决方案的浓度。另一方面,该技术可以有效地用于监测和评估像真菌或细菌等微生物的生长。

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