- ENLITEN®套件按预期执行
- LOD = 0.81 fmol/well
- 德赢vwin官网客服BMG Labtech Microplate Reader是线性穿越套件范围，R2= 0.99595.
介绍
的Promega ENLITEN®试剂盒用于检测ATP（腺苷5'-三磷酸）。ATP的测量广泛用于确定食物中的微生物量，可用于定量组织和血清中的细胞。恩赐®套件使用L / L（Luciferase / Luciferin）快速定量ATP。L / L催化下面显示的560nm发光反应，与ATP为限制性试剂。
本实验的目的是确定检测限(LOD)。Promega表明试剂盒可以检测到10-16 mol或0.1 fmol以下的ATP。更多关于Promega的ENLITEN的信息®套件可在他们的网站上找到www.promega.com。
材料与方法
所有的材料都是通过正常的分销渠道从制造商获得的。
- Promega enniten.®套件
- 蒸馏水
- 德赢vwin官网客服BMG LABTECH microplate reader with injector microplate, White 96 well, Costar
此外，还根据需要使用了各制造商的耗材，如移液管尖端和微离心管。
实验
制备所有试剂，并根据Promega的方案进行测定。该程序的最重要方面是绝对确定样品没有污染。ATP是一个在几乎所有内容上发现的普通化合物，在处理套件时必须妥善小心。使用序列稀释将ATP溶液用浓度从1000 fmol /孔/孔的浓度浸泡移液到板中。在使用微孔板读取器内置试剂注射器测量之前，将L / L溶液（100μl）注入每个孔中。用10％漂白剂的溶液清洁注射器，允许在使用前30分钟静置在注射器和管中。然后用蒸馏水冲洗管子以除去漂白溶液。
将板插入仪器中，然后使用以下参数在发光模式中读取：
德赢vwin官网客服BMG LABTECH阅读器参数
| 发射过滤器： | 空(取决于阅读器) |
| 阅读模式: | 好吧 |
| 获得: | 3300-3500（取决于型号） |
| 不。时间间隔: | 20. |
| 积分时间: | 0.5秒 |
| 延迟: | 1 |
从每个浓度的重复测量中减去空白测量的平均值，并绘制结果。在标准曲线上执行线性回归，以提供所计算的值，如图1和图2所示。
成绩与讨论
ATP试剂盒的性能在100 ~ 0.195 fmol/well范围内呈线性。对数据进行线性回归，得到R2值为0.99859。空白重复测量(n=20)，以确定测量井的标准偏差。空白的标准偏差为138 RLUs。使用这些参数LOD、LOQ和R2计算并总结在表1中。
表1：参数
| 参数 | FLUOstar | 灯光癖 |
| R2 | 0.99589. | 0.99895 |
| l | 0.81 fmol /好 | 0.20 fmol /好 |
| LOQ. | 2.70 FMOL /井 | 0.67 Fmol /井 |
跟踪套件的技术资源手册指出，此套件旨在测量10-11至10-16摩尔的ATP。如数据所示，BMG Labtech介质读卡器在所述范围内执行。德赢vwin官网客服然而，BMG La德赢vwin官网客服btech微孔板读者可以读取到远低于较低的检测限，超出Promega的线性®ATP工具包。ATP的LOD使用这个ENLITEN®ATP试剂盒约为1 fmol每井的fluosstar /北极星系列仪器，完全合理的多功能微孔板阅读器，当然在一般用途的实验室使用的领域。这些结果来自一个有代表性的仪器，应该作为单一仪器的数据。它们不能准确地反映整个读者，但应该给用户一个合理的性能预期。不同仪器的结果可能不同，也可能不不同。
