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Promega ENLITEN试剂盒使用BMG LABTECH酶标仪德赢vwin官网客服

ron earp jarrett脸颊 德赢vwin官网客服 05/2007
  • ENLITEN®套件按预期执行
  • LOD = 0.81 fmol/well
  • 德赢vwin官网客服BMG Labtech Microplate Reader是线性穿越套件范围,R2= 0.99595.

介绍

的Promega ENLITEN®试剂盒用于检测ATP(腺苷5'-三磷酸)。ATP的测量广泛用于确定食物中的微生物量,可用于定量组织和血清中的细胞。恩赐®套件使用L / L(Luciferase / Luciferin)快速定量ATP。L / L催化下面显示的560nm发光反应,与ATP为限制性试剂。

本实验的目的是确定检测限(LOD)。Promega表明试剂盒可以检测到10-16 mol或0.1 fmol以下的ATP。更多关于Promega的ENLITEN的信息®套件可在他们的网站上找到www.promega.com

材料与方法

所有的材料都是通过正常的分销渠道从制造商获得的。

  • Promega enniten.®套件
  • 蒸馏水
  • 德赢vwin官网客服BMG LABTECH microplate reader with injector microplate, White 96 well, Costar

此外,还根据需要使用了各制造商的耗材,如移液管尖端和微离心管。


实验

制备所有试剂,并根据Promega的方案进行测定。该程序的最重要方面是绝对确定样品没有污染。ATP是一个在几乎所有内容上发现的普通化合物,在处理套件时必须妥善小心。使用序列稀释将ATP溶液用浓度从1000 fmol /孔/孔的浓度浸泡移液到板中。在使用微孔板读取器内置试剂注射器测量之前,将L / L溶液(100μl)注入每个孔中。用10%漂白剂的溶液清洁注射器,允许在使用前30分钟静置在注射器和管中。然后用蒸馏水冲洗管子以除去漂白溶液。

将板插入仪器中,然后使用以下参数在发光模式中读取:


德赢vwin官网客服BMG LABTECH阅读器参数

发射过滤器: 空(取决于阅读器)
阅读模式: 好吧
获得: 3300-3500(取决于型号)
不。时间间隔: 20.
积分时间: 0.5秒
延迟: 1

从每个浓度的重复测量中减去空白测量的平均值,并绘制结果。在标准曲线上执行线性回归,以提供所计算的值,如图1和图2所示。

成绩与讨论

ATP试剂盒的性能在100 ~ 0.195 fmol/well范围内呈线性。对数据进行线性回归,得到R2值为0.99859。空白重复测量(n=20),以确定测量井的标准偏差。空白的标准偏差为138 RLUs。使用这些参数LOD、LOQ和R2计算并总结在表1中。


表1:参数

参数 FLUOstar 灯光癖
R2 0.99589. 0.99895
l 0.81 fmol /好 0.20 fmol /好
LOQ. 2.70 FMOL /井 0.67 Fmol /井

跟踪套件的技术资源手册指出,此套件旨在测量10-11至10-16摩尔的ATP。如数据所示,BMG Labtech介质读卡器在所述范围内执行。德赢vwin官网客服然而,BMG La德赢vwin官网客服btech微孔板读者可以读取到远低于较低的检测限,超出Promega的线性®ATP工具包。ATP的LOD使用这个ENLITEN®ATP试剂盒约为1 fmol每井的fluosstar /北极星系列仪器,完全合理的多功能微孔板阅读器,当然在一般用途的实验室使用的领域。这些结果来自一个有代表性的仪器,应该作为单一仪器的数据。它们不能准确地反映整个读者,但应该给用户一个合理的性能预期。不同仪器的结果可能不同,也可能不不同。

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