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ProteetaetAg活性Ne免疫测定:快速测试,以量化患者中性粒细胞弹性蛋白酶水平

奥利佛·卡尼(1)凯莉·莫菲特(2)莎琳·罗伯(2) (1) 德赢vwin官网客服BMG实验室(2)ProAxsis 02/2016
  • 结合特定的免疫检测步骤,ProteaseTag™活性依赖免疫测定提供了选择性和定量测量患者痰样品中的活性NE水平
  • Clariostar.®用于对结果进行频谱分析并自动返回量化数据

表的内容

介绍

呼吸疾病如囊性纤维纤维(CF)和慢性阻塞性肺病(COPD)涉及慢性感染的循环,并在气道的FL ammation中延长,导致肺功能差。已显示抗生素和抗助药治疗,帮助患者在这些情况下。1在CF和COPD中,中性粒细胞驱动炎症反应,2,3而中性粒细胞弹性酶(NE)的存在,一种由中性粒细胞分泌的蛋白酶,已被确定为感染和炎症的关键生物标志物。


因此,检测NE可用于监测患者的疾病状态,因为它与疾病活动的急性发作相关。


现有的活性蛋白酶定量方法基于显色或荧光肽,在复杂的生物样品(如痰)中,这些肽可被其他活动(宿主或细菌来源)分解,因此缺乏准确定量所必需的特异性。传统的免疫分析法不能区分酶的活性形式和非活性形式,因此不能准确地描绘疾病的严重程度。


在本应用说明中,活性NE蛋白酶asetag™试剂盒用于检测和量化患者样品中的NE水平。ProAxsis的ProteaseTags™被设计成抑制和结合特定的蛋白酶。一旦结合,它们就会形成一个桥,连接到一个坚固的支架上,使它们能够结合到一种免疫分析格德赢Vwin安全吗式中,用于特定的定量。

测定原理

ProteaseTag™活性网元免疫分析使用NE- tag捕获活性网元。(图1)随后的抗体步骤提供了额外的信号放大,灵敏度增加。检测在elisa类型的格式内实现,并在3小时内提供结果。NE-Tag检测是定量的、歧视性的。本品适用于以下物质的测定:

  • 痰液溶胶
  • 支气管肺泡灌洗
  • 伤口渗出物
  • 无血清细胞培养

该方法的检测范围为1000 ~ 15.6 ng/mL,灵敏度为3.3 ng/mL。

程序概要

1.带有NE-Tag的外套板。洗。
2.添加标准和样品。NE- tag从样品中捕获活性NE,使酶失活并稳定。洗。
3.抗体共轭步骤通过随后添加比色底物/停止液能够检测到配合物。
4.在450nm的吸光度模式下测量平板。

材料与方法

  • ProAxsis公司的ProteaseTag™中性粒细胞弹性蛋白酶免疫分析试剂盒(PA001)
  • CLARIOstar microplate读卡器来自BMG实验室德赢vwin官网客服

在检测之前,从CF患者身上收集痰样本并进行简单处理。所有的标准品和样品都保存在冰中,然后加入孔板。所有其他试剂在加入前先置于室温。


按照制造商的说明稀释标准品,并将样品、标准品和空白板一式两份加入标准品板中。

仪器设置

测量类型: 吸光度
阅读模式: 终点
波长: 光谱或离散波长在450 nm
解决时间: 0.5秒
震动设置: 震动频率[rpm]: 300
摇动模式:双轨道
震动定时:读数前3秒
温度: 37°C

结果与讨论

首先,分析了标准的光谱预算(图2)。该确定450nm是读取吸光度的最佳波长。

使用MARS数据分析软件校正初始原始数据。在标准曲线向导的帮助下生成标准曲线。然后从回归曲线自动计算来自每个样品的HNE浓度(图3)。

结论

ProteaseTag™活性NE免疫分析提供了一个简单和快速的方法,评估活性中性粒细胞弹性酶水平在给定的样本。由于该检测方法准确地定量了活性蛋白酶水平,该试剂盒构成了临床样本中检测感染和炎症的可靠方法。除了气道样本,活性NE已经在许多其他生物样本中被定量,如伤口液。该试剂盒与其他基于活性的检测活性NE的方法显著相关,但与基于肽的底物相比,当用于复杂的生物样品时,该试剂盒具有更大的选择性和特异性。在确定蛋白酶生物标志物和其他疾病标志物之间的关系或联系时,这可能会产生重大影响。


CLARIOstar提供了一个读取和分析数据直至完成的平台,从而提供了一种快速、容易重复的检测方法。


参考文献

1. Elizur,A.等。(2008)胸部。133(2),489-495。
2.Gifford, a.m., Chalmers, J.D. (2014) Curr。当今。内科杂志。21(1),16 - 22。
3. Tetley,T.D.(2005)Curr。药物靶标。过敏。4(6),607-618。

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