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ProteetaetAg活性Ne免疫测定:快速测试,以量化患者中性粒细胞弹性蛋白酶水平

Oliver Carney(1)Kelly Moffitt(2)Charlene Robb(2) (1)B德赢vwin官网客服MG Labtech(2)Proaxsis 02/2016
  • 与特定免疫检测步骤相结合,ProteAteTag™活性依赖性免疫测定提供了患者痰样品中活性Ne水平的选择性和定量测量
  • Clariostar.®用于谱分析结果并自动返回量化数据

介绍

呼吸疾病如囊性纤维纤维(CF)和慢性阻塞性肺病(COPD)涉及慢性感染的循环,并在气道的FL ammation中延长,导致肺功能差。已显示抗生素和抗助药治疗,帮助患者在这些情况下。1在CF和COPD中,中性粒细胞驱动IN FL ammatory反应,2,3并且已经建立了中性粒细胞弹性蛋白酶(Ne)的蛋白酶体,一种由中性粒细胞分泌的蛋白酶作为感染和在FL Ammation的关键生物标志物。


因此,Ne的检测可用于监测患者的疾病状态,因为它与疾病活动的急性发作的发生相关。


确定活性蛋白酶定量的制定方法基于发色性或流体源性肽,即在复杂的生物样品(例如痰)中,可以被其他活动(原产地的宿主或细菌)分解,因此缺乏准确的必要特定城市定量。传统的免疫测定不区分酶的活性和无活性形式,因此不要准确地映射疾病的严重程度。


在此应用笔记中,显示了ActiveNE ProteetAg™试剂盒,用于检测和量化患者样品中的NE水平。ProAXSIS'ProteAteetAgs™设计用于抑制和结合特定的蛋白酶。一旦绑定,它们就会形成一个桥到坚固的支持,允许它们掺入Immumoassay格式以进德赢Vwin安全吗行特定量子量。

测定原则

ProteAteetag™Active Ne免疫测定使用NE-TAG捕获有源网元。(图1)随后的抗体步骤提供额外的信号放大器,其灵敏度增加。在ELISA型格式内实现检测,并在不到3小时内提供结果。用NE-TAG检测是定量和歧视性的。测定试剂盒适用于以下下列:

  • 痰溶胶
  • 支气管肺泡灌洗
  • 伤口渗出
  • 血清自由细胞培养物

测定的检测范围为1000-15.6ng / ml,敏感性为3.3ng / ml。

程序摘要

1.带有Ne-Tag的涂层板。洗。
2.添加标准和样品。NE-TAG从样品中捕获有源网元,灭活和稳定酶。洗。
3.抗体 - 缀合物步骤通过随后添加比色基板/停止溶液,能够检测复合物。
4.测量450nm的吸光度模式中的板。

材料与方法

  • ProteetAgag™活性嗜中性粒细胞弹性蛋白酶免疫蛋白酶免疫键(PA001)来自Proaxsis
  • 来自BMG Labtech的Clariostar Microplat德赢vwin官网客服e Reader

在测定之前,用CF和Brie Fl Y加工从个体中收集痰液。在添加到微孔板之前,将所有标准和样品保持在冰上。加入前将所有其他试剂带到室温。


稀释标准物,并根据制造商的说明和样品,标准和坯料重复加入板材的标准。

仪器设置

测量类型: 吸光度
阅读模式: 终点
波长: 450nm的光谱或离散波长
安定时间: 0.5秒
摇动设置: 摇动频率[RPM]:300
摇动模式:双轨道
摇晃时间:板材阅读前3秒
温度: 37℃

成绩与讨论

首先,分析了标准的光谱预算(图2)。该确定450nm是读取吸光度的最佳波长。

使用MARS数据分析软件校正初始原始数据。在标准曲线向导的帮助下生成标准曲线。然后从回归曲线自动计算来自每个样品的HNE浓度(图3)。

结论

ProteAteetAg™活性Ne免疫测定提供了一种简单且快速的方法,可以在给定样品中评估活性嗜中性粒细胞弹性蛋白酶水平。因为测定准确量化了活性蛋白酶水平,所以试剂盒构成了检测感染和临床样品中的氨化的可靠方法。除了气道样品之外,有源NE已经在许多其他生物样品中被量化,例如伤口流体。Kit显着与基于活动的方法相关联,以检测有源NE,但是当与复杂的生物样品一起使用时具有比肽基底物更大的选择性和特定城市。当确定蛋白酶生物标志物和其他疾病标志物之间的关系或关联时,这可以是显着的影响。


Clariostar提供了一个平台,用于读取和分析数据以完成,从而产生用于运行测定的快速且易于可重复的方法。


参考

1. Elizur,A.等。(2008)胸部。133(2),489-495。
2. Gifford,A.M.,Chalmers,J.D.(2014)Curr。拍摄。血糖。21(1),16-22。
3. Tetley,T.D.(2005)Curr。药物靶标。过敏。4(6),607-618。

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