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用荧光染料量化双链DNA:BMG Labtech仪器上的QUBit德赢vwin官网客服

Andrea Krumm MarkGröneFrankaMaurer 德赢vwin官网客服BMG Labtech GmbH,Ortenberg,德国 07/2017
  • flyostar.®欧米茄,本百事院®和clariostar.®用Qubit染料量化DSDNA
  • 微孔板格式增加吞吐量并促进复制测量

概括

DNA的定量是后续应用的标准实验室活动和关键,例如下一代测序(NGS)。在Qubit™荧光计上分析了广泛使用的Qubit™核酸染色染料。它可以在样品制备管中直接测量荧光强度,并自动计算基于并联测量的两种标准的DNA浓度。这提供了一种简单,快速而直观的方式来定量DSDNA。但是,吞吐量使用qubit™有限荧光计只有一个样本一次可以分析。

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介绍

DNA的量化是标准实验室活性,并且对于随后的应用,例如下一代测序(NGS)是关键的。除了UV光谱法定量和核酸的Quali阳离子之外,FL荧光探针还提供所需的具体城市和精确度,以在NGS样品制备期间测量双链DNA(DSDNA)。可以在Qubit™Floorometer上分析广泛使用的Qubit™核酸染色染料。它测量直接在样品制备管中的流荧光强度,并自动计算基于并联测量的两种标准的DNA浓度。这提供了一种简单,快速而直观的方式来定量DSDNA。但是,使用Qubit™FL uorometer有限地使用吞吐量,只有一次一个样品可以一次分析。此应用笔记介绍了Qubit的方式®DSDNA HS FL uorophore可用于定量BMG Labtech微孔板读卡器上的DSDNA。德赢vwin官网客服


材料与方法

  • Qubit™DSDNA HS测定套件(Thermofisherscienti Fi C,#Q32854)
  • TRIS-EDTA缓冲器100x(Carl Roth GmbH&Co.KG)
  • 96-孔微孔板(黑色,底部,Greiner)

通过将60μlQubitDSDNA HS试剂与11.94ml Qubit DSDNA缓冲液混合来制备Qubit工作溶液,得到12ml工作溶液。在1x Te缓冲液中制备标准的稀释液。


对于96个孔板中的Qubit DNA量化量,将190μl将Qubit工作溶液与10μlDNA标准(0和10ng /μL提供的Qubit试剂盒提供)混合,或稀释DNA标准。用以下设置测量荧光强度荧光ω,Clariostar和Pherastar。


仪器设置

荧光强度,端点协议
视镜设置 Pherastar. 光学模块 FI 485 520
Clariostar. 单色仪

刺激:483-14

二向西:自动502.5

排放:530-30

过滤器

刺激EX485.

二向西:LP504

排放:530-40.

Fluostar omega. 过滤器

刺激:ex485

排放:EM520

在测量之前调整的增益和焦点
顶级光学
常规设置 安定时间:0.2秒 0.5秒
每井闪光数量 20.

成绩与讨论

qubit.®DSDNA HS是用于双链DNA的流荧光染料标本,并防止污染物如RNA或DNA萃取芳族杂质的测量。为了评估测量Qubit™DNA染料的设置,使用ClarioStar微孔板读取器进行激发和发射波长的光谱扫描(图1)。发现激励最大值为503nm,525nm处的发射光的最大值,这花了涂抹485/520 fi lter组合或lvf单色仪TM值483-14 / 530-30的设置用于量子位检测。

接下来,测试Qubit DNA量化量的线性度。在使用Qubit染料检测到0.1ng /μl-10ng /μl之间的Qubit标准DNA稀释液的Qubit标准DNA稀释液。通过相关COF展R2> 0.9999(图2)所示,在这些浓度上线性是线性的。在Flyostar Omega,Clariostar和Pherastar Microplate读卡器上获得这种线性。

鉴于在0.1ng /μl-10ng /μl之间的浓度范围内的Qubit DNA量化的线性度,我们假设根据量子位测量,两个用于定义校准曲线的浓度可能是suf。量化用Qubit DSDNA HS化学的已知量DNA和基于0和10ng /μLDNA标准的三倍蛋白的标准曲线,允许精确地确定DNA的量(图3)。考虑到样品体积可以在1μl和20μl的范围内变化,因为制造商的提示,可测量的DNA样品浓度范围可以用BMG Labtech读取器上的Qubit量化为50pg /μl-100之间的Qubit德赢vwin官网客服ng /μl。

表1:表显示了从两点的计算的DNA浓度

在BMG Labtech微孔板读卡器上测定DNA浓度德赢vwin官网客服
输入DNA浓度 Fluostar omega. Clariostar. Pherastar.
0.1 ng /μl 0.109 0.108 0.101
0.2 ng /μl 0.196 0.203 0.195
1 ng /μl 0.983 1.028 1.001
2 ng /μl 1.962 2.025 2.000

结论

使用BMG Labtech的任何多模微相读取器一起使用FL荧光量子位DSDNA HS染色允许DSDNA样品的量化浓度在50pg /μl-100ng /μl之间。德赢vwin官网客服该组合增加了吞吐量并实现了易于复制的测量。

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