实时| BMG检测细胞凋亡和坏死情况德赢vwin官网客服

CLARIOstar^®与ACU提供了一个系统，可以在受控环境中执行实时测量
多路复用的RealTime-Glo^TMAnnexin V凋亡和坏死分析试剂检测与凋亡相关的磷脂酰丝氨酸暴露事件，同时也报告坏死导致的膜完整性丧失

表的内容

{{项目。内容}}

总结

细胞死亡对多细胞稳态很重要，但它在人类疾病中也有不幸的作用。靶向细胞毒素和细胞保护药物的发现对于治疗癌症或神经退行性变是至关重要的。为了描述疾病模型中的失调和对实验刺激的反应，定义细胞死亡的机制和反应动力学是很重要的。传统的实验方法往往是耗时、劳动密集、成本高和不足的。

在这里，我们介绍了Promega新的real-time - glo™Annexin V凋亡和坏死检测方法，该方法提供了简单的添加-混合检测方法，以活细胞，实时的形式。而www.v66088.com 与大气控制单元(ACU)提供了对双重发光和荧光信号的敏感检测，它保持适当的[O₂]和[有限公司₂你的细胞的环境。这种组合可以让你在测试完成后离开，确保你不会错过重要的细胞反应，不管什么时候发生变化。

介绍

虽然细胞死亡是多细胞稳态的一个重要的正常结果，但它在许多人类疾病中也有不幸的作用。因此，靶向细胞毒素和细胞保护剂的发现可能在治疗癌症、神经退行性变和一系列其他疾病方面具有重要意义。为了充分认识疾病模型中的失调现象，以及对实验刺激的反应，建立细胞死亡的作用机制和明确反应动力学是很重要的。处理细胞死亡模式的传统实验方法费时费力，成本高且不充分。

这里我们描述了凋亡和坏死的实时监测。Promega新RealTime-Glo^TMAnnexin V凋亡和坏死检测提供了简单的添加-混合检测，在活细胞，实时格式。而带大气控制单元的“克拉罗星”(ACU)提供对双重发光和荧光信号的灵敏探测，同时保持适当的[O₂]和[有限公司₂你的细胞的环境。这种组合可以让你在测试完成后就离开，确保你不会错过重要的细胞反应，不管什么时候发生变化。

测定原理

实时- glo膜联蛋白V凋亡和坏死检测原理 — 图1:real - time - glo Annexin V凋亡和坏死检测原理。将两个含有荧光素酶(NanoBiT™)二亚基的膜联蛋白V -融合蛋白引入样品中，对健康细胞不产生发光。与PS结合后，补体酶现在能够产生光信号。用前荧光坏死检测试剂探针监测膜完整性的变化。

磷脂酰丝氨酸(PS)从内膜小叶转移到外膜小叶被认为是健康细胞向凋亡过渡的标志¹。多种方法利用Annexin V与PS的结合来鉴定细胞开始凋亡。

real - time - glo™Annexin V凋亡和坏死检测利用了包含发光酶的二元亚基的Annexin -fusion蛋白²(NanoBiT™)，仅由于其对PS的亲和力而进入互补接近状态。在时间释放的底物存在下，补充的酶报告实时PS暴露。坏死检测试剂报告坏死后膜完整性的变化。总之，这些实时测量方法建立了细胞死亡的作用机制(凋亡、原发性坏死或替代方案)。

材料与方法

RealTime-Glo^TMAnnexin V凋亡和坏死实验(Promega, Cat #JA1011)
CLARIOstar^®与ACU (BMG 德赢vwin官网客服LABTECH)
白色，透明或不透明底，96孔板(合星)
ATCC的K562细胞^®
龙沙阴性选择自然杀伤细胞
其他可从市场上获得的试剂

real - time - glo™Annexin V凋亡和坏死分析试剂按照技术手册的指示制备，并在给药或治疗时加入。

在剂量反应实验中，最大浓度为10 μM的硼替佐米8点稀释系列应用于预接种的K562细胞，每孔10000个细胞。车辆处理和无细胞空白也包括在内。

在NK细胞实验中，用IL-15刺激NK细胞，然后按指定比例加入K562细胞。单独使用NK或K562细胞作为暴露对照。通过使用一个脚本和以下设置，使用CLARIOstar微孔板阅读器完成测量和孵育。

仪器的设置

RealTime-Glo™Annexin V凋亡检测
光学设置	发光,底部光学
	过滤器	没有过滤器
	获得	3500
一般设置	测量时间间隔	1.0秒

坏死检测
光学设置	荧光强度，顶部光学
	过滤器	励磁482 - 16 Diochroic LP504 排放530 - 40
	获得	运行前调整
一般设置	沉淀时间	0.2秒
	不。的闪光	40