模拟体外缺血再灌注损伤作为药物筛选的潜在方法

发言人:本allsop(研究助理,药物发现集团,伦敦大学学院),凯瑟琳蜡(BMG Labtech Ltd.的应用经理)德赢vwin官网客服

心脏病发作是死亡的主要原因。尽管西方国家的数字正在减少,但在中国,印度或印度尼西亚等国家观察到增加。心脏病发作期间心脏损伤的主要介体是缺血再灌注损伤(IRI)。缺血当细胞被剥夺氧气和代谢因子时,会发生,例如,当血管被堵塞时。当堵塞被分解时,富含氧气的血液再灌注血管和细胞,并且另外损害组织。再灌注随后的缺血期导致反应性氧(ROS)产生和线粒体渗透性过渡孔隙开口,导致凋亡细胞死亡和心肌梗死。伦敦大学学院(UCL)的工作已经证明了通过胰岛素如胰岛素的细胞信号传导分子的风险(再灌注损伤激酶)信号传导途径的激活是对体外研究和动物模型的缺血再灌注损伤是保护的。


尽管其关键疾病作用,但目前的缺血再灌注损伤的体外建模差。这是由于在体外评估实验产出的同时启动,维持和逆转急性缺氧损害的难度。迄今为止,使用缺氧室,其吞吐量有限并进行终点措施。这些限制导致了对动物模型的广泛使用和过度依赖。Langendorff准备使用孤立的小鼠心来评估缺血再灌注的后果。在这里,我们描述了一种新的缺血再灌注损伤模型,可以实现细胞死亡和细胞内O2的复用动力学监测。随后,可以进行细胞活力,线粒体膜电位和ROS的终点测定。该技术基于微孔板读取器,具有单独调节测量室中的氧气和二氧化碳水平的能力。Clariostar.有其独特的大气控制单位(ACU)另外倾斜的装置中的气体浓度,允许快速气体变化。这样,缺血再灌注气体变化可以模仿微孔板格式的细胞实验,并且可以同时监测它们的生物效应。


动力学监测使验证胰岛素保护的验证能够验证缺血再灌注损伤。Langendorff实验原本报道了胰岛素的保护作用。在体外测定中的新颖性证实,在胰岛素的存在下降低了通过Celltox Green监测的细胞死亡。此外,测量了额外的生物结果,并对胰岛素的保护作用更好地了解。反应性氧气在实验结束时通过荧光测定测量在胰岛素的存在下,可以解释降低的缺血再灌注损伤。


该基于微孔板读数器的测定适用于中产量(96孔板)。可以筛选小分子药物以防止缺血再灌注损伤。使用诸如IPSC衍生的心肌细胞等细胞进一步增强了实验的相关性,并且大大降低了对动物实验的需求。与常规缺血再灌注测定相比,新方法在实时增加动力学维度和对细胞事件的监测。使用荧光探针的细胞内氧合的测量表明,当细胞经历缺血或再灌注时的时间。将若干实时测定结合在一个孔中的可能性进一步将氧合状态与诸如细胞死亡的细胞结果相结合。


本教程将解释用于研究缺血再灌注损伤影响的方法和测定格式,并将描述Clariostar的特征®和新发布的www.v66088.com 支持这些应用的微孔板读取器平台。德赢Vwin安全吗

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