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Clariostar的新型大气控制单元(ACU)为长期细胞的测定提供了多种性

卡尔·彼得斯(1)特雷西·沃塞拉(2) (1) 德赢vwin官网客服BMG LABTECH 02/2015
  • Clariostar与ACU保持未治疗细胞中的细胞健康和增殖
  • 可以用双链体测定监测细胞
  • 可以直接在细胞培养中发现时间和剂量依赖性化合物效应

介绍

细胞活力和细胞毒性的分析是基于细胞的测定的实例,其从实时检测这些参数的变化的能力中获得了很大的好处。实时检测允许在发生细胞毒性或抗增殖改变时识别确切的时刻。当使用微孔板读卡器进行这些评估时,可以在单板上监测多个样品和浓度。


来自Promega的两个测定(Realtime-Glo®MT细胞活力和蜂窝电毒细胞毒性测定)在72小时内测量。为了保持细胞健康,Clariostar配备了大气控制单元(ACU)。这使得能够检测对细胞增殖和细胞毒性的时间和剂量依赖性影响。

测定原则

的RealTime-Glo®MT细胞活力测定是依赖于代谢(MT)降低细胞潜力的生物发光测定。纳米村®荧光素酶和细胞 - Permant Pro-Nanoluc®将底物添加到培养物中的细胞中。活细胞减少基材,然后将其扩散到介质中,其中纳米速度快速使用®酶产生与活细胞数成比例的发光信号(图1)。

基于非活性的Celltox TM绿色细胞毒性测定由细胞膜缺乏染料组成,该染料被排除在活细胞之外。当细胞膜变得损害时,染料进入其与DNA结合并变得荧光的细胞。荧光信号与培养物中的死细胞数量成比例(图2)。

材料与方法

  • 384-嗯,从康宁公司来的白色透明底孔板
  • Realtime-Glo.TM值来自Promega的MT细胞活力测定
  • Celltox.TM值来自Promega的绿色细胞毒性测定
  • Clariostar.®来自BMG Labtech的微孔板读卡器德赢vwin官网客服

K562细胞在384孔孔中涂覆,并用一组试验化合物处理,具有已知的增殖和细胞毒性的作用。用ACU的Clariostar用于孵育细胞并量化发光,每小时变化,每小时改变72小时。

荧光仪器设置

方法: 底部读数
每井闪烁: 50.
视镜设置: 激励:F:482-16 /
发射F:530-40
二向色性: LP 504.
循环数量: 73.
周期: 60分钟
收益+焦点: 在测试之前调整

发光仪器设置

测量间隔时间: 1.0秒
视镜设置: 没有过滤器
循环数量: 73.
周期: 60分钟
获得: 3500
周期: 60分钟
收益+焦点: 在测试之前调整

ACU设置

CO.2 5%
O.2 监测
目标温度: 37℃

结果与讨论

具有ACU的Clariostar能够完全维持整个72小时时间过程的未处理细胞的正常增殖和健康状况(图3)。

诸如酪氨酸激酶抑制剂Bosutinib的不同浓度处理的细胞,最初表现出增殖,尽管较高的浓度抑制了增殖。对于所有但最低浓度,似乎发生变化约25小时,并且细胞活力开始减少(图4)。

所有浓度的Bosutinib也会在某种程度上增加细胞毒性。细胞毒性在随着活力降低的重点(图5)重合的约30小时内开始增加。

结论

ACU的Clariostar使细胞快乐使得可以实现长期基于细胞的测定。在这种情况下,在72小时内监测细胞活力和细胞毒性。在这里,我们展示了对酪氨酸激酶抑制剂Bosutinib的作用的每小时评估。结果表明晴间依赖于细胞毒性以及细胞活力的时间和剂量依赖性。

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