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BMG LabTech仪器的播放器ADP2 FP分析认证德赢vwin官网客服

Meera Kumar(1)弗兰卡Maurer(2)ej戴尔(2) (1)Bellbrook Labs(2)BMG德赢vwin官网客服 Labtech 12/2014
  • 纸张®ADP.2测定套件是一个基于ADP的检测的远红竞争性FP免疫测定
  • 纸张®可以监测产生ADP的任何酶促反应(ATP范围为0.1-1000μm)
  • Pherastar.®FS.,Clariostar.®和偏光棒®欧米茄通过Bellbrook Labs验证

介绍

Bellbrook Labs为酶提供了各种高通量筛选测定。账面®ADP.2FP测定可用于检测任何激酶或ATP酶的活性。这种简单的ADP检测方法适用于所有ADP生产酶,并且可以与任何基材一起使用。


在本申请中,我们在执行播放器期间创建的ADP / ATP标准曲线®使用来自BMG Labtech的不同微孔板读者的测定。德赢vwin官网客服


测定原则

账面®ADP.2测定是一种基于抗体检测ADP的流晶偏振免疫测定(图1)。该测定平台提供了普遍询问催化与ATP群体转移反应的所有酶的可能性。在测定的步骤之一中,酶催化磷酸盐从ATP转移到蛋白质,肽,脂质或小分子,导致ADP的积累。

在第二步中,纸张®ADP.2加入含有与抗ADP抗体结合的ADP Alexa633示踪剂的检测混合物。如果存在导致必要的ADP的酶活性,则所结合的示踪剂由ADP移位。自由示踪剂快速旋转,导致偏振值较低。如果由于没有酶活性而没有游离的ADP,则示踪剂仍然与抗体结合。这整个结构非常缓慢地旋转,给出更高的偏振数。因此,ADP生产导致流动晶体极化的降低。


材料与方法

  • 黑色384井和1536个来自康宁的良好微孔板
  • 黑色96井半区域FL在底部聚苯乙烯NBS™微孔板,康宁
  • 纸张®ADP.2来自Bellbrook Labs,Madison,Wi(包括ADP Alexa633示踪剂,ADP2抗体,停止和检测缓冲B,ATP和ADP)

标准准备
纸张®通过运行10μmATP/ ADP和0.1μMATP/ ADP标准曲线(24 Repacing)来确定HTS测定性能,作为这种模拟酶反应的标准曲线。从10μM或100nM ATP开始,在增加量中加入ADP,ATP分别降低,分别保持总腺嘌呤核苷酸浓度为10μm和100nm。


ADP检测混合物
该溶液含有4nm示踪剂,1x停止和检测缓冲液,15μg/ ml(10μm)和1μg/ ml(100nm)。在井中稀释两倍的ADP检测混合物,其在孔中导致以下内部浓度:2nm示踪剂,0.5倍缓冲液和抗体。

抗体浓度
每个孔的固定抗体浓度为0.5μg/ ml(100nm标准曲线)和7.5μg/ ml(10μm标准曲线)。请注意,取决于酶反应条件,最佳抗体浓度可以局限性不同。为了最佳测定性能,需要在实验中使用的特定酶和缓冲条件下进行抗体滴定。


仪器设置
将10μL标准标准物和10μl检测混合物混合在384孔微型板中,将其密封并在室温下温育1小时。孵育后,除去密封剂并测量板。对于96孔半面积板,孔中的最高体积为140μL。对于1536孔板,孔中的最高体积为8μL。

Flyostar / Polartar Omega Clariostar. Pherastar.FS.
检测模式 荧光极化
方法 端点,顶级视镜
格式 96井 96嗯,384井,1536井 96嗯,384井,1536井
视镜设置 外滤波器:630-10,EM-Filter:670-10 外滤波器:590-50,EM-Filter:675-50 Transcreener特定FP光学模块:FP 590 675 675
MP目标值 设置为含有免费示踪剂的良好态度是20兆欧

成绩与讨论

图2显示了在96孔格式中测量的ADP / ATP标准曲线。在日志级别上的图形消除了对应于零的点。为了沿着曲线包括所有12个点,0μmADP/10μmATP的值以0.01μm的位置绘制。

图3和4分别显示了384孔和1536孔格式测量的标准曲线。

结论

透气仪的普遍普遍性®ADP.2套件将降低测定的发展工作,从而允许HTS更早发生。作为测定质量的特征参数,计算Z'值> 0.7,其表示出优异的测定性能。Z'值在0.5和1之间表示高度稳健的筛选测定,并重复高质量的仪器。

基于本申请说明中示例性的数据,偏光乐欧米茄,Clariostar以及PherastarFS.被证明是账面®ADP.2FP测定。

纸张®是Bellbrook实验室的专利技术。

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