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在注射时间读取装备读数的Clariostar上的Sparcl表现

马克·卡梅伦(1)卡尔·彼得斯(2) (1) Lumigen(2)美国德赢vwin官网客服BMG实验室 11/2016
  • 在注入SPARCL检测所需的时间,CLARIOstar能够进行读取
  • 384孔板的检测提供了提高产量的可能性

介绍

自20世纪70年代引入ELISA(酶联免疫吸附测定法)以来,它仍然是一种非常流行的评估分析物存在或数量的技术。1、2尽管这种方法具有很高的实用性,并且不断进步以提高灵敏度,但大多数ELISA类型分析仍需要洗涤步骤。这些步骤既耗时又繁琐,或者需要专门的设备来完成。


使用Lumigen公司的SPARCL进行免疫测定,可以进行非水洗检测。我们之前已经展示了Omega酶标读卡器在这种荧光检测中的性能。3.在这里,我们展示了CLARIOstar对于SPARCL免疫分析的检测也非常出色。此外,我们还表明SPARCL检测可以以384孔的格式进行,以提高吞吐量。

测定原则

正如SPARCL的首字母缩写所示(空间邻近分析试剂捕获发光),它检测溶液中的分析物并产生光信号(图1)。它是一种免疫测定方法,使用两种抗体:一种结合吖啶,另一种结合辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,马萝卜过氧化物酶)。这些抗体与分析物的结合使底物和酶接近,当触发溶液(H2O2),则产生光信号。闪光的强度与分析物的数量成比例,使其成为一种定量分析物的工具。

材料与方法

  • 人IgG药代动力学分析试剂盒(Lumigen)
  • CLARIOstar microplate reader (B德赢vwin官网客服MG LABTECH)
  • 白色96孔板(Greiner)
  • 白色,384孔板(康宁)

标准曲线采用1:2系列稀释剂配制。用96孔板在大鼠血清中制备人IgG稀释物进行试验。IgG的最大浓度为2875 ng/mL。为了在384孔板中显示检测性能,将人IgG用0.1%的BSA稀释在PBS中。最大浓度为1000 ng/mL。


使用96孔板进行分析,如Lumigen说明书所述。4


使用384孔板进行分析,如所述4先加入20µl的抗体混合物,再加入10µl的不同浓度的IgG,形成标准曲线。孵育后加入2µl的本底还原试剂。


使用CLARIOstar测试协议读取板,设置如下,并注入触发溶液。

仪器的设置

检测模式: 发光,阅读
检测方法: 井模式,动力学
间隔数量: 100(96井),50(384井)
间隔时间: 0.02
获得: 3500(96孔)、3300(384孔)
焦点(mm): 11.0
排放过滤器: 没有过滤
注射针: H3
注塑开始时间: 0
注射体积(μL): 75(96井)、30(384井)
泵速度: 300µl / s
孔径匙: 只有384年

成绩与讨论

SPARCL试验产生具有相当重复性特征的闪光发光信号。使用CLARIOstar在96孔板中检测到的信号与之前观测到的信号非常吻合(图2A)。


使用MARS数据分析软件,获得了2秒的数据收集段的发光信号之和。由此,我们可以表明,响应是强大的,信号为空白计算为587,用于高浓度标准。此外,回归分析表明,数据FITS至4-参数FI T.可以从中获得所预期的(图2B),从中可以是可能的计算。

我们进一步能够以384孔板格式确认执行Sparcl测定的能力。在384孔测试中收集的数据表现出与触发溶液的注射的相似响应(图3A)。


再次,在数据分析完成后,我们可以确认384孔板的分析基于空白值的信号(=576为高标准)同样是稳健的。此外,预期的4参数拟合曲线可以用来将浓度与信号联系起来(图3B)。

结论

Lumigen的SPARCL分析试剂盒与BMG LABTECH的CLARIOstar酶标仪高度兼容。德赢vwin官网客服我们在检测人类IgG的药代动力学试验中获得了强有力的反应。对于那些寻求更高吞吐量的人,我们发现384孔板选项也表现得非常好。


参考资料

1.Engvall, E. and Perlman, P.(1971)。酶联免疫吸附试验(ELISA)免疫球蛋白定量测定G.免疫化学8,871 - 874。
2.范伟曼,B.K.和舒尔斯,A.W.H.M.(1971)。使用抗原-酶偶联物进行免疫分析。feb信件15,232 - 236。
3.Xie, W., Cameron, M. and Peters, C.(2015)。使用SPARCL技术开发用于生物标志物检测和药代动力学研究的免疫测定法。
4.有关SPARCL的更多信息,请联系LumigenSPARCL@beckman.com或访问www.lumigen.com/detection-technologies/sparcl

Lumigen和SPARCL是Lumigen, Inc.的商标。

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