基于波长的双向发射报告基因

发光检测报道基因一直是分子生物学家工具箱中的关键工具之一。随着双记者测定的出现,如Promega的DLR™测定,记者基因在核算与感兴趣的促进者无关的表达活性和细胞增殖时变得更加准确,更线性和更好。然而,双荧光素酶要求注射两种试剂,由于混合,检测正时或注射条件不当,造成的伪影,使其更易于适用,更容易受到伪影。

新的双辉光测定

现在研究人员有几种良好的选择,可利用具有稳定,长的发光记者的双记者格式,发出不同波长。Chroma-Glo®来自Promega,Pierce-Thermo的荧光素酶双测定和Life Technologies的双灯®更方便和适用于更高的吞吐量检测方法。任何这些测定可以读取两倍于a德赢vwin官网客服BMG Labtech介质读卡器与其他不能力的仪器相比同时双重检测两个波长。

过滤分离不同的荧光素酶信号

萤火虫和Renilla.荧光素酶酶以类似的波长发射,但利用不同的基板,因此可以在不同的时间精确地检测它们。以不同波长发出的记者,如高斯Renilla.,可以通过检测不同的波长使用滤波器来检测不同的时间。这允许使用发出稳定信号的发光反应,这些信号有时持续数小时。塞普里纳例如,LUC在蓝色约为450nm的蓝色中具有排放峰,而Red-Firefly Luc在620nm左右发出峰值。通过在450处检测发光发射的能力,然后在620处检测发光发射,来自一位记者的光发光不会干扰对方的检测。现在存在于各种波长的少量荧光素酶构建体,并允许研究人员设计各种兼容性和条件。

具有双排放检测的仪器

德赢vwin官网客服BMG Labtech仪器尤其适合于检测双发射器,因为它们可以同时测量两个发射波长。而大多数能够波长歧视的大多数亮度将测量第一个记者然后返回测量第二个,BMG Labtech的双排放读者可以同时测量,加倍吞吐量。德赢vwin官网客服同时检测不仅可以读取时间,由于流体运动,气泡和温度效应不会引入计算中,可变性显着减少。

图1:使用红色(cbrluc; a)和绿色(cbg99luc; panel b)荧光素酶的Chroma-glo™化学的线性和敏感性。在赤道™NS-808上运行300-3.000的细胞当量并使用Pherastar仪器读取。所有测定均以1536孔格式为8μL总体积进行。

更广泛的带宽过滤器提供了最佳性能

基于单色仪的板式读者通常对双光荧光素酶记录者不起作用。大多数单色器具有固定,窄的带通道20nm或更小。荧光素酶发射通常相当宽。在绿色的情况下Renilla.,从450至650nm - BMG Lab德赢vwin官网客服tech设计过滤器专门针对双发射记者进行光线,以宽泛过整个峰值,允许检测到20倍的光线。更多的光线意味着降低测量时间,这导致与我们的板式读者协同作用。

双发射检测与更快的基于滤波器的波长选择相同,即在BMG LabTech读卡器上比大多数其他发光计读取时间读取时间可能是四倍。德赢vwin官网客服

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